این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۲، شماره ۲، صفحات ۸۳-۹۲
عنوان فارسی تولید آنتی‌بادی علیه پروتئین نوترکیب اتصالی فریک انتروباکتین
چکیده فارسی مقاله هدف: باکتری اشرشیاکلی O157: H7، از زیرگروه اشرشیاکلی‌های خونریزی‌دهنده داخلی (انتروهموراژیک اشرشیاکلی) است. این باکتری تولید کننده توکسینی شبیه شیگا توکسین است که در ایجاد اسهال‌های خونی، غیرخونی و نشانگان یورمی همولیتیک نقش دارد. نشانگان یورمی همولیتیک یک عامل مهم ناتوانی کلیوی در کودکان و بزرگسالان است. ژن fepA از باکتری اشرشیاکلی O157:H7 با 2241 جفت‌باز، پروتئین غشایی به نام پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین را کد می‌کند که برای جذب فریک انتروباکتین در باکتری اشرشیاکلی ضروری است. در صورت ممانعت از جذب آهن توسط باکتری، می‌توان میزبان را از تهاجم آن ایمن نمود. در این مطالعه تأثیر ایمنی‌زایی پروتئین غشایی FepA بررسی شد. مواد و روش‌ها: به‌منظور تهیه پروتئین نوترکیب FepA، پس از کشت باکتری اشرشیاکلی O157:H7، ژنوم آن به روش لیز قلیایی تخلیص شد. با کمک واکنش زنجیره پلیمراز ژن fepA از اشرشیاکلی به‌طول 2241 جفت‌باز فراوان‌سازی و سپس روی ناقل بیانی pET28a(+) کلون شد. پس از انتقال سازه نوترکیب به میزبان اشرشیاکلی سویه Bl21DE3، بیان پروتئین مورد نظر توسط غلظت‌های مختلف ایزوپروپیل تیو بتا- دی گالاکتوزید القا و بهینه‌سازی شد. نتایج بیان با SDS-PAGE بررسی و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون Ni-NTA تخلیص شد. در نهایت پس از تزریق پروتئین تخلیص شده به موش و تکمیل دوره ایمن‌سازی، تیتر آنتی‌بادی با سنجش الایزا ارزیابی شد. نتایج: پروتئین نوترکیب با وزن 85 کیلودالتون تولید و تخلیص شد. تزریق پروتئین به موش‌های Balb/C نشان‌دهنده توان بالای آن در تحریک سیستم ایمنی و تولید آنتی‌بادی و نیز توان آنتی‌بادی تولید شده در شناسایی پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین که منجر به تقویت مقاومت موش در برابر LD50 106 است. نتیجه‌گیری: با توجه به توان بالای آنتی‌بادی نوترکیب در شناسایی پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین، امکان استفاده از این آنتی‌بادی در محدود کردن رشد و توسعه انتروباکتریاسه مطرح می‌شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله FepA، اشرشیاکلی O157، H7، آهن،
عنوان انگلیسی Antibody production against enterobacteriacea using recombinant Ferric Enterobactin protein (FepA)
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Escherichia coli O157:H7 is a gram-negative rod-shaped bacterium. E coli O157:H7 is an enterohemorrhagic (EHEC) strain of the bacterium Escherichia coli and a cause of foodborne illness. Infection often leads to bloody diarrhea by producing a toxin called Shiga toxin, which damages the intestines, and occasionally leads to kidney failure, especially in young children and elderly people. A 2241 bp fepA gene of E.coli O157:H7 codes for production of a ferric enterobactin binding membrane protein that is essential for iron uptake by the bacterium. Inhibition of iron uptake can protect invasion of host by the bacterium. In this study we attempted to evaluate immunogenicity of the membrane protein, FepA. Materials and Methods: In order to produce recombinant FepA protein, the genomic, fepA gene of 2241 bp long was amplified by PCR from E coli O157:H7. The PCR product was ligated to pET28a. The recombinant protein was then expressed in E. coli BL21DE3 by IPTG induction. SDS-PAGE analysis was carried out and the recombinant protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. The purified recombinant protein was injected to Balb/C mice in order to induce immunity. Antibody titer was determined by ELISA. Results: The recombinant protein of 85 KD was produced and purified. Immunogenicity of the recombinant protein was determined by injecting Balb/C mice. The antibody produced therein could efficiently recognize and bind ferric enterobactin binding protein, thus heaving mice tolerance of 106LD50. Conclusion: With a view to the significant recognition by the antibody of ferric enterobactin binding protein, the notion of its application in restriction of enterobacteriacea propagation could be feasible.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله .E coli O157,H7, Iron
نویسندگان مقاله سید مهدی لاری بقال | seyed mehdi larrie baghal
department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شاهد (Shahed university)

سید لطیف موسوی گرگری | seyed latif mousavi gargari
department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شاهد (Shahed university)

ایرج رسولی |
professor, department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran, p.o.code 3319118651
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شاهد (Shahed university)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6049_69bc8ed92cf6980b5529ea5388557ade.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات