این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۱۷-۳۱
عنوان فارسی استفاده از روش Real-Time PCR روی نمونه‏های آمنیوسیت برای تشخیص پیش از تولد نشانگان داون
چکیده فارسی مقاله هدف: این مطالعه به‏منظور بررسی امکان تشخیص نشانگان داون پیش از تولد با روش Real-Time PCR انجام شد. در این راستا، تعیین روش مناسب برای تخلیص DNA از نمونه‏های آمنیوسیت برای دستیابی به DNA با کیفیت بالا نیز مورد توجه قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ابتدا زنان بارداری که در غربالگری از طریق سنجش نشانگرهای بیوشیمیایی و سونوگرافی خطر بالای ابتلای جنین به نشانگان داون را داشتند، به مرکز ﺁمنیوسنتز معرفی شده و از مایع آمنیوتیک آن‏ها نمونه‏گیری شد. تخلیص DNA از 59 نمونه مایع آمنیوتیک با روش‏های مختلف انجام شد که این روش‏ها شامل روش جوشاندن، روش رسوب‏دهی با نمک، دستورالعمل استخراج DNA از خون و بافت با کیت DNPTM (سیناژن)، دستورالعمل استخراج DNA از سلول با کیت DNA Isolation Kit for cells and tissues (Roche)، دستورالعمل استخراج DNA از بافت با کیت MagNa Pure DNA Isolation (Roche) و کیت QIAamp DNA Micro (Qiagen) بودند. سپس کیفیت و کمیت نمونه‏های تخلیص شده به‏وسیله دستگاه اسپکتروفتومتر نانودراپ NanoDrop® ND-1000 ارزیابی شد. واکنش Real-Time PCR با استفاده از رنگ سایبرگرین I (Applied Biosystems, UK) به‏منظور تکثیر اختصاصی ژن‏های DYRK1A2 و DSCAM و ژن مرجع PMP22 روی نمونه‏های تخلیص شده انجام شد. آنالیز داده‏ها با استفاده از روش مقایسه‏ای چرخه آستانه برای تعیین میزان ژنی و تعیین تعداد نسخه‏های کروموزوم 21 صورت گرفت. نتایج: این بررسی نشان داد که DNA استخراج شده از نمونه‏های مایع آمنیوتیک با استفاده از کیت QIAamp DNA Micro دارای کمیت و کیفیت مطلوب است. تکثیر اختصاصی ژن‏های هدف و مرجع انجام و تفاوت گروه طبیعی و گروه مبتلا براساس اختلاف در چرخه آستانه مشخص شد. نتیجه‌گیری: تشخیص پیش از تولد با روش Real-Time PCR روی نمونه‏های DNA تخلیص شده از سلول‏های مایع آمنیوتیک با استفاده از کیت Qiagen امکان‏پذیر است. نتایج حاصل با نتایج مشابه حاصل از روش‏های متداول سیتوژنتیک قابل مقایسه است.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Use of Real-Time PCR method on the amniocyte samples for prenatal diagnosis of Down syndrome
چکیده انگلیسی مقاله Objective: In this study, the possibility of prenatal diagnosis of Down syndrome with Real-Time PCR method was evaluated. In this context, optimization of a suitable method for purification of high quality DNA from amniotic fluid samples was also considered. Materials and Methods: Pregnant women who had the high risk of having babies with Down syndrome were selected according to the biochemical and sonographic data and referred to the amniocentesis center. The DNA of total 59 amniotic fluid samples were extracted with different methods including boiling method, salting out method, Procedures of DNA extraction from Blood and Cell Culture by DNPTM Kit (CinnaGen), Procedure of DNA extraction from cells by DNA Isolation Kit for cells and tissues (Roche), Procedure of DNA extraction from Tissue by MagNa Pure DNA Isolation kit (Roche), and QIAamp DNA Micro Kit (Qiagen). Then, the quality and quantity of the extracted DNA were evaluated by the NanoDrop® ND- 1000 spectrophotometer device. Real-Time PCR reaction using fluorescent dye SYBR Green I (Applied Biosystems, UK) was performed to specifically amplify DSCAM and DYRK1A2 genes and the reference gene (PMP22). Data analysis was performed using comparative cycle threshold method for the determination of the gene dosage and determining the number of copies of chromosome 21. Results: This study showed that DNA extracted from amniotic fluid samples using QIAamp DNA Micro Kit (Qiagen) has the desirable quantity and quality for Real-Time PCR. Specific proliferation of targets and reference genes was achieved and difference between normal and affected groups based on differences between their gene dosages was determined. Conclusion: Prenatal diagnosis of Down syndrome is feasible by the Real-Time PCR method using DNA samples from amniotic fluid cells extracted by QIAamp DNA Micro Kit (Qiagen). The results are comparable to the corresponding results from conventional cytogenetic methods.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله DNA extraction, Down syndrome, Nanodrop, Prenatal diagnosis
نویسندگان مقاله رضا مهدیان |
department of medical biotechnology, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فهیمه شاهرخی |
department of human genetics, faculty of medicine, tabriz university of medical science, tabriz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تبریز (Tabriz university)

مجتبی محدث اردبیلی | mohaddes ardebili
department of medical genetics, faculty of medicine, tabriz university of medical science, tabriz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تبریز (Tabriz university)

زهرا فردی آذر | fardi azar
department of gynecology, faculty of medicine, tabriz university of medical science, tabriz, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تبریز (Tabriz university)

احمد کامیاب |
department of human genetics, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

المیرا شمسیان |
department of human genetics, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

مینا حیات نوسعید | hayat nosaeid
department of molecular medicine, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

زهرا kaeeni مقدم | kaeeni moghaddam
department of molecular medicine, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6021_c683ac0b96b5d5030b9c14b09cb66e3f.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات