این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۲، شماره ۴، صفحات ۷۱-۸۳
عنوان فارسی بیان، خالص‏سازی و بررسی فعالیت آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی SAP۲ کاندیدا آلبیکنس در سیستم مخمری پیکیا پاستوریس
چکیده فارسی مقاله هدف: آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی (SAP2) کاندیدا آلبیکنس نقش محوری در اتصال، تهاجم و بیماری‏زایی این مخمر فرصت‏طلب دارد. هدف از این مطالعه کلون نمودن، بیان و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم SAP2 است. همچنین در این تحقیق برای اولین بار، از سیستم یوکاریوتی پیکیا پاستوریس برای بیان پروتئین نوترکیب SAP2 استفاده شد. مواد و روش‏ها: ژن Sap2 کاندیدا آلبیکنس با انتهاهای چسبان EcoR1 و SacII توسط PCR تکثیر و درون ناقل T/A ساب‏کلون شد. با استفاده از آغازگرهای عمومی توالی این ژن تعیین شد و سپس درون ناقل بیانی pGAPZαA قرار گرفت. سازه نوترکیب به درون مخمر پیکیا پاستوریس انتقال داده شد. ژن Sap2 طی پدیده نوترکیبی همولوگ درون ژنوم مخمری پیکیا پاستوریس داخل شد. پروتئین بیان شده به کمک روش وسترن بلاتینگ و با استفاده از آنتی‏بادی مونوکلونال بر علیه پروتئین SAP2 تأیید شد. در نهایت پروتئین به‏دست آمده با کمک ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی Ni-NTA تخلیص و فعال بودن آنزیم تأیید شد. نتایج: در این تحقیق تکثیر ژن Sap2 کاندیدا آلبیکنس و وارد نمودن آن درون ژنوم مخمر بیانی پیکیا پاستوریس با روش نوترکیبی همولوگ انجام شد. علاوه بر این، کلونی از مخمر را به‏دست آمد که پروتئین نوترکیب SAP2 را به محیط ترشح می‏کرد. بالاترین بیان پس از طی زمان 96 ساعت در دمای 30 درجه سانتی‏گراد به‏دست آمد. نتیجه‏گیری: القای ژن Sap2 در مخمر پیکیا پاستوریس منجر به افزایش قدرت بیان انبوه این ژن نسبت به سیستم بیانی باکتریایی می‏شود. همچنین نیاز به تغییرات بعد از ترجمه و فعال نمودن آنزیم، به علت استفاده از سیستم بیانی یوکاریوتی، از بین می‏رود. برطبق یافته‏های تحقیق حاضر، آسپارتیل اسید پروتئیناز تخلیص شده در این تحقیق خود فعال بوده و قادر به تجزیه BSA به‏عنوان یک سوبسترا است. این پروتئین نوترکیب در pH اسیدی بیشترین فعالیت را دارد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله پیکیا پاستوریس، کاندیدا آلبیکنس، کلونینگ Sap2،
عنوان انگلیسی Expression, purification and investigation of sap2 Candida albican’s activity in pichia pasturis yeast system
چکیده انگلیسی مقاله Objective: The secreted aspartic proteinases (Sap2) of Candida albicans has prominent role on Candida adherence, invasion, and pathogenicity. The aim of this study was cloning, expression and characterizing of Sap2 enzyme. Also in this study for the first time, the expression system P. pasturis was used for expressing the recombinant protein. Materials and Methods: C. albicans Sap2 gene was amplified by PCR with sticky ends, EcoR1 and SacII, and it was subcloned into the T/A vector. The sequencing of this gene was done with universal primers and then the Sap2 gene was cloned into pGAPZαA expression vector. The construct was transformed into P. pasturis yeast; the Sap2 gene integration into the yeast genome was accomplished by the homologous recombination. The expressed protein was confirmed by western blotting using monoclonal antibody against Sap2 protein. Finally, the recombinant protein was purified by Ni-NTA chromatography column, and the activity of the enzyme was confirmed. Results: In this study, we successfully amplified C.albicans Sap2 gene and subsequently integrated into the yeast pichia pasturis genome by homologous recombination. Moreover, we were able to identify a yeast clone secreting the recombinant protein. The optimum over expression of sap2 protein was obtained after 96 h, at 30ْ C. Conclusion: Expression of Sap2 gene in P. pasturis, in comparison to bacterial expression system, leads to a high-level expression, and also need for post translation modifications, that might be required for the activity of enzyme, is obviated in the yeast system. Based on our results, the purified acid aspartyl proteinase purified from P. pasturis was capable of degrading BSA as a substrate in-vitro. The recombinant Sap2 protein had maximum activity in an acidic pH.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله C. albicans, P. pasturis, Sap2 cloning
نویسندگان مقاله الهه محمودی |
ph.d. student, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

حمیدرضا کلهر | hamid reza
assistant professor, department of biochemistry, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

محمد حسین یادگاری | mohammad hossein
assistant professor, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مجید صادقی زاده |
professor, department of genetics, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

زهیر محمد حسن | zohair mohammad
professor, department of medical immunology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6126_fac4bfc7401e096420e8e19ade7c8a64.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات