این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۳، شماره ۴، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی تولید کلون و بررسی بیان توالی همپوشانی از ژن NS۳ ویروس هپاتیت C به‏وسیله سازه بیانی DNA
چکیده فارسی مقاله هدف: هدف تولید یک سازه بیان کننده توالی یک ناحیه همپوشان از ژن NS3 از ویروس ایزوله ایرانی است. مواد و روش‏ها: ابتدا بخش میانی ژن NS3 با روش Nested-RT-PCR و با استفاده از سرم بیمار مبتلا به ژنوتیپ 1a ویروس هپاتیت C تکثیر شد. بعد از کلون آن درون ناقل کلونینگ TA و غربالگری کلون‏ها براساس روش سفید- آبی و Colony-PCR این کلون‏های منتخب با روش تعیین توالی و هضم آنزیمی با BglII ارزیابی شد. توالی جدید با استفاده از نرم‏افزار با توالی‏های دیگر مرجع مقایسه و درخت تکاملی ترسیم شد. بخش میانی ژن NS3 تأیید شده و سپس به درون سازه بیانی، کلون شد و کلون‏های مناسب با استفاده از دو نوع Colony-PCR شناسایی شد. ارزیابی نهایی بیان ژن با مشاهده GFP توسط میکروسکوپ فلورسانس، روش RT-PCR و وسترن بلات روی سلول‏های ترانسفکت شده با سازه بیانی تأیید شد. نتایج: توالی میانی NS3 از روی سرم بیمار تکثیر و نتایج توالی‏یابی و مقایسه ژنی نشان داد که این توالی به توالی‏های مرجع شباهت داشته و در شاخه ژنوتیپ 1 ویروس هپاتیت C قرار دارد. با روش Colony-PCR وجود و نیز جهت ژن درون پلاسمید بیانی تأیید شد. مشاهده GFP توسط میکروسکوپ فلورسانس، روش RT-PCR و وسترن بلات به‏ترتیب نمایانگر انتقال موفق سازه، بیان ژن و نیز تولید پروتئین در سلول‏های 293 بود. نتیجه‏گیری: سازه بیانی حاوی بخش میانی ژن NS3 که بایستی فاقد فعالیت پروتئازی باشد، نسبت به طول کامل ژن NS3 می‏تواند در القای بهتر ایمنی توسط سلول‏های عرضه کننده آنتی ژنی در موارد واکسن ویروس هپاتیت C مفیدتر واقع شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله سازه DNA، ویروس هپاتیت C، ژن NS3،
عنوان انگلیسی Cloning and evaluation of expression of a novel overlapping region of NS3 gene of Hepatitis C virus by expressing vector
چکیده انگلیسی مقاله Objective: In this project, our aim was to construct a novel expressing vector harboring a new sequence from overlapping region of NS3 gene of HCV from infected Iranian patient. Materials and Methods: The partial NS3 (pNS3) gene was amplified by Nested-RT-PCR method using sera of HCV infected patients harboring genotype 1a. After purification and cloning the pNS3 into TA-cloning vector, the best colony was selected based on Blue/White screening and colony-PCR following by confirmation with sequencing and restriction digestion with BglII. The sequenced gene was compared with other reference sequences using alignment softwares. The resultant pNS3 gene subcloned into the expression vector, IRES vector, followed by selection the suitable clones by 2 different colony-PCRs. The gene expression was evaluated using GFP detection, RT-PCR and western blotting techniques after transfection of the IRES-pNS3 vector into the 293 cell line. Results: After pNS3 sequence amplification by RT-PCR, sequencing results showed high homology among the sequences with other reference sequences. This result also showed that it belonged to genotype 1 of HCV. Colony-PCR showed the insertion of gene into expressing vector with the right orientation. GFP expression, RT-PCR and western blotting confirmed transfection of vector, expression of pNS3 gene and production of its protein in 293 cells respectively. Conclusion: This novel expressing vector harboring partial region of NS3 gene in compare to full NS3 gene maybe more useful in immune induction by antigen presenting cells due to absence of genes responsible for protease activity of the protein in the setting of HCV vaccine.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله HCV Virus, NS3 Gene, DNA Construct
نویسندگان مقاله سید یونس حسینی | seyed younes


فرزانه صباحی |
department of virology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

محمد حسین مدرسی | mohamad hossein


سید محمد موذنی | seyed mohammad
department of immunology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مهدی صابری فیروزی | saberi firoozi


مهرداد روانشاد |
department of virology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

داود مهربانی |


مجید مجرد |
department of medical genetics, faculty of medicine, tehran university of medical sciences, tehran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی تهران (Tehran university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6159_7b861d0c3afa0319bf2771db4e56e5ab.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات