این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۴، شماره ۴، صفحات ۳۹-۴۹
عنوان فارسی ساخت بکمیدهای نوترکیب واجد ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزای انسانی
چکیده فارسی مقاله هدف: ویروس آنفلوانزای A (H1N1) از مهم‌ترین زیرگونه‌های ویروس آنفولانزاست که منجر به پیامدهای متعددی در جهان شده است. هماگلوتینین یکی از مهم‌ترین آنتی‌ژن‌های این ویروس می‌باشد که باعث ایجاد پاسخ ایمنی می‌شود. اتصال این پروتئین به گیرنده‌های سلول میزبان منجر به شروع فرایند بیماری‌زایی می‌شود. با توجه به نقش حیاتی مرحله اتصال ویروسی، این پژوهش درصدد استخراج و جای‌سازی ژن هماگلوتینین و زیرواحد بزرگ آن (HA1) با هدف تولید شاتل ناقل نوترکیب باکیولوویروس (بکمید) برای تولید پروتئین نوترکیب در سلول‌های حشره است. مواد و روش‌ها: ویروس آنفلوانزای انسانی A/New Caledonia 99/20/(H1N1) در کشت سلولی MDCK تکثیر شده و RNA کامل ویروسی توسط محلول Easy–red تخلیص شد. سپس طول کامل ژن هماگلوتینین و ژن HA1 توسط روش RT-PCR و آغازگرهای اختصاصی تکثیر و ابتدا در ناقل pGEM-TEasy و سپس در پلاسمید pFastBac HT جای‌سازی شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژن‌های فوق در سلول‌های میزبان DH10Bac تولید شد. نتایج: محصولات PCR ژن هماگلوتینین با الکتروفورز روی ژل آگارز و هضم با آنزیم‌های محدودالاثر ارزیابی شد. ناقل نوترکیب pGEM-Teasy و پلاسمید دهنده نوترکیب pFastBac HT توسط روش PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف تأیید شد. تولید DNA نوترکیب بکمیدی نیز توسط افتراق کلونی‌های آبی-سفید، الکتروفورز روی ژل آگارز 7/0 درصد، PCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و آغازگرهای pUC/M13 مورد تأیید قرار گرفت. نتیجه‌گیری: در این پژوهش، بکمید نوترکیب واجد ژن هماگلوتینین و زیرواحد بزرگ آن با موفقیت ساخته شد. در ادامه سلول‌های حشرات به‌منظور تولید باکیولوویروس نوترکیب با سازه‌های فوق ترانسفکت شده و پروتئین‌های نوترکیب برای مطالعات آتی تولید خواهد شد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله DNA نوترکیب، باکیولوویروس، هماگلوتینین، واکسن زیرواحدی،
عنوان انگلیسی Construction of Recombinant Bacmid DNA Encoding Influenza Virus A (H1N1) Hemagglutinin Gene
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Influenza virus A (H1N1) is an important subtype of the influenza respiratory viruses, which has important worldwide implications. Hemagglutinin (HA), an important viral antigen, is responsible for binding to human cell receptors leading to an onset of the disease process. Considering the critical role of viral attachment, this study focuses on the extraction and cloning of HA and its large subunit HA1 genes to generate recombinant baculovirus shuttle vectors (bacmid) in order to produce recombinant proteins in insect cells. Methods: Human influenza virus A/New Caledonia 99/20/(H1N1) was propagated in MDCK cell culture. Total viral RNA was extracted using easy-red solution. The full-length HA genome and HA1 fragment were amplified by RT- PCR using specific primers, cloned into a pGEM®-TEasy vector, and then subcloned into a pFastBac HT plasmid. Finally, recombinant bacmids that contained the genes of interest were produced in E. coli DH10Bac™ cells. Results: Expected PCR products of HA genes were evaluated through gel electrophoresis and restriction enzyme analysis. Recombinant pGEM®-TEasy vectors and pFastBac HT donor plasmids were confirmed by PCR, digestion, and sequencing. Construction of recombinant bacmid DNA was verified by using blue-white colony screening, overnight electrophoresis, and PCR analysis that used either pUC/M13 or gene-specific primers. Conclusion: In this study, we have successfully constructed recombinant Bacmid DNA that encoded the full-length HA genome and its HA1 subunit. We intend to transfect sf9 insect cells with these constructs to generate recombinant baculovirus and produce large amounts of desired proteins for future studies.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Recombinant DNA, Baculovirus, Hemagglutinin, Subunit Vaccine
نویسندگان مقاله سمانه حسین زاده | samaneh hossainzadeh
department of biology, faculty of basic sciences, science and research branch of islamic azad university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

فاطمه فتوحی | fatemeh fotouhi
influenza research lab, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

بهرخ فرهمند | behrokh farahmand
influenza research lab, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

مریم صالح | maryam saleh
influenza research lab, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

آتنا یوسفی | atena yousefi
department of biology, faculty of basic sciences, science and research branch of islamic azad university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

بهناز حیدرچی | behnaz heydarchi
influenza research lab, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

معصومه توسطی خیری | masoumeh tavasoti kheiri
influenza lab research, department of virology, pasteur institute of iran, tehran, iran.
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6203_12de099567bbba8dae7b8701cd9466ed.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات