این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۵، شماره ۳، صفحات ۹۳-۱۰۲
عنوان فارسی مقایسه بیان شکل تغییر یافته BMP-۷ در میزبان‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی
چکیده فارسی مقاله هدف: BMP-7 عامل رشد چند منظوره‌ای است که اغلب به دلیل خواص استخوان‌زایی خود شناخته شده است. به دلیل قیمت بالا، دسترسی به این پروتئین برای مصارف درمانی محدود است. تاکنون تولید هترولوگ پروتئین نوترکیب BMP-7 در تعدادی از سیستم‌های بیانی انجام یافته است. در مطالعه حاضر شکل جدیدی از پروتئین در میزبان‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی بیان شده است. مواد و روش‌ها: برای بیان در سیستم بیانی پروکاریوتی، پروتئین جدید به فضای پری‌پلاسمی باکتری اشریشیا کلی ترشح شد و تخلیص توسط ستون تمایلی انجام گرفت. برای بیان در سیستم بیانی یوکاریوتی، قطعه cDNA با طول کامل به سلول یوکاریوتی CHO منتقل شد و کلون‌های پایدار انتخاب شد. بیان پروتئین نوترکیب در هر دو سیستم بیانی توسط آزمون وسترن بلات تأیید شد. نتایج: پروتئین نوترکیب جدید به صورت دایمر با وزن مولکولی 36-38 کیلودالتون در سلول یوکاریوتی و به صورت مونومر با وزن مولکولی 16 کیلودالتون در سیستم بیانی اشریشیا کلی تولید شد. تجزیه و تحلیل کمّی با استفاده از الایزا نشان داد که سطح بیان جهش یافته در سیستم بیانی یوکاریوتی و پروکاریوتی به ترتیب 40 و 135 نانوگرم در هر میلی‌لیتر از محیط کشت است. نتیجه‌گیری: در این مطالعه سطح بیان پروتئین در اشریشیا کلی حداقل 3 برابر میزان بیان در سلول یوکاریوتی بود. با این وجود بهینه‌سازی‌های بیشتر برای به‌دست آوردن مولکول دایمر در اشریشیا کلی مورد نیاز است. نتایج مطالعه مذکور نشان داد که بیان پری‌پلاسمی ممکن است برای تولید پروتئین‌های پیچیده مانند BMPs مناسب باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی A Comparison of Bone Morphogenetic Protein-7 Mutant Expression in Prokaryotic and Eukaryotic Hosts
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Bone morphogenetic protein-7 (BMP-7) is a multifunctional growth factor predominantly recognized for its osteoinductive properties. Due to the high cost of this protein, the availability of BMP-7 for treatment is limited. The heterologous production of recombinant hBMP-7 has been performed in a number of expression systems. In this study a novel form of BMP-7 was expressed in eukaryotic and prokaryotic hosts. Methods: For expression in the prokaryotic system, the novel protein was secreted to the periplasmic space of Escherichia coli using a pelB signal sequence followed by single-step purification by Ni2+-charged column chromatography. In the mammalian cell expression system, we transferred a full-length cDNA encoding precursor of the novel protein to CHO cells then selected stable clones by using the appropriate antibiotic concentration. Expressions in both systems were confirmed by Western blot analysis. Results: The novel recombinant protein was produced as a 36-38 kDa dimer in the CHO cell line and a 16 kDa monomer in the Escherichia coli system. Quantitative analysis according to ELISA showed that the expression levels of the mutant protein in the eukaryotic and prokaryotic expression systems were 40 ng/ml and 135 ng/ml of the culture media, respectively. Conclusion: In this study, the expression level in Escherichia coli was at least three times more than observed in the CHO cells. However, further optimization is required to obtain a dimer protein in Escherichia coli. The results show that periplasmic expression may be suitable for the production of complex proteins such as BMPs.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله لیلا نعمت الهی | leila nematollahi
ph.d. candidate, department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فریدون مهبودی | fereidoun mahboudi
associated professor, department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

محمد عزیزی | mohammad azizi
ph.d., department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فرزانه برخورداری | farzaneh barkhordari
b.sc., department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

احمد عادلی | ahmad adeli
b.sc., department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

وحید خلج | vahid khalaj
assistant professor, department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6226_17f0bca390f322448c470fc3a29d9325.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات