بینا، جلد ۱۹، شماره ۳، صفحات ۲۲۲-۲۳۳
عنوان فارسی کشت سلول‌های اندوتلیال قرنیه انسانی در محیط آزمایشگاه با استفاده از مایع آمنیوتیک انسانی
چکیده فارسی مقاله هدف: ارزیابی اثر مایع آمنیوتیک انسانی (Human Amniotic Fluid; HAF) بر روی رشد سلول‌های اندوتلیال قرنیه انسانی (Human Corneal Endothelial Cells; HCECS) و هم‌چنین تعریف محیط کشت برای رشد این سلول‌ها. روش پژوهش: سلول‌های آندوتلیوم در محیط 12DMEM-F که با سرم جنین گاوی 20 درصد غنی شده بود کشت داده شدند. پس از اشباع محیط کشت، سلول‌ها مورد درمان با تریپسین قرار گرفته و به محیط کشت حاوی سرم جنین گاوی 20 درصد و مایع آمنیوتیک انسانی 10، 20 و 30 درصد منتقل شدند. HAF از زنان باردار در سه ماهه اول بارداری گرفته شد. جهت ارزیابی اثر HAF بر روی رشد و توانایی زیستی سلول، از روش ELISA برای بررسی تکثیر و مرگ سلولی استفاده شد. ماهیت سلول‌های کشت داده شده در محیط حاوی مایع آمنیوتیک 20 درصد با استفاده از روش‌های ایمونوسیتوشیمی و Real time PCR جهت نشانگرهای ویژه HCECs شامل 67Ki-، Vimentin، Na/K-ATPase، و 1ZO- بررسی شد. یافته‌ها: کشت‌های اولیه در محیط حاوی مایع آمنیوتیک منجر به رشد و تکثیر سلول‌های آندوتلیوم در 8/95 درصد موارد گردید. Real time PCR و ایمونوسیتوشیمی نشان داد که نشانگرهای Na/K-ATPase و 1ZO- که ویژه HCECs می‌باشند در سلول‌های کشت شده در محیط حاوی مایع آمنیوتیک 20 درصد، بیش‌تر از محیط شاهد (حاوی سرم جنین گاوی) بیان می‌شود. آزمایش ایمونوسیتوشیمی روی سلول‌‌های اندوتلیال کشت داده شده با HAF 20 درصد، افزایش بیش‌تری را در بیان نشانگرهای مذکور در مقایسه با محیط‌های حاوی غلظت‌های 10 درصد و 30 درصد HAF نشان داد. تعداد سلول‌های اندوتلیال کشت داده شده در HAF 20 درصد که نشانگرها را بروز می‌دادند برای شاخص‌های Vimentin ،1-ZO ، Na/K-ATPase به ترتیب 98 درصد، 95 درصد، و 100 درصد بود. بیش از 80 درصد سلول‌ها، 67-Ki را بروز می‌دادند که نشان می‌دهد سلول‌ها ظرفیت تکثیر خود را حفظ کرده‌اند. میزان افزایش شاخص‌های Vimentin ،1-ZO ،Na/K-ATPase به ترتیب 5 برابر (003/0P=)، 5/3 برابر (001/0P=) و 3 برابر (03/0P=) در محیط حاوی HAF 20 درصد در مقایسه با محیط شاهد بود. Real time PCR افزایش 400 برابری (008/0P=) در بیان ژن Na/K-ATPase و افزایش 500 برابری (01/0P=) در بیان ژن 1-ZO در محیط حاوی HAF 20 درصد در مقایسه با محیط شاهد نشان داد. نتیجه‌گیری: محیط حاوی HAF 20 درصد به طور مشخصی باعث افزایش توانایی تکثیر سلول‌های آندوتلیال قرنیه انسان می‌شود ولی مشخصات مورفولوژی و آنتی‌ژنیک آن‌ها را حفظ می‌نماید. بنابراین HAF می‌تواند به عنوان یک مکمل غنی در مطالعات تکثیر HCECs در نظر گرفته شود. · مجله چشم‌پزشکی بینا 1393؛ دوره 19، شماره 3: 233-222. 
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Effect of Amniotic Fluid on the Invitro Culture of Human Corneal Endothelial Cells
چکیده انگلیسی مقاله Purpose: To evaluate the effect of human amniotic fluid (HAF) on the growth of human corneal endothelial cells (HCECs) and to establish an in vitro method for the expansion of HCECs. Methods: HCECs were cultured in DMEM-F12 supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS). Confluent monolayer cultures were trypsinized and passaged using 20% FBS- or 10%, 20%, or 30% HAF-containing media. Cell proliferation and cell death ELISA assays were performed to assess the effect of HAF on cell growth and viability. The identity of cells cultured with 20% HAF were studied using immunocytochemistry (ICC) and Real-Time RT-PCR techniques for markers presenting specific characteristics of HCECs including Ki-67, Vimentin, Na/K-ATPase and ZO-1. Results: Primary cultures of HCECs were successfully established under HAF-containing media which led to rapid cell proliferation according to cell proliferation and death ELISA assays. Real-Time PCR and ICC revealed that expression of Na/K-ATPase and ZO-1 in 20% HAF cell cultures was more compared to controls (20% FBS). Conclusion: HAF containing medium exhibited an invaluable stimulatory effect on HCEC growth. It can be regarded as an enriched supplement in HCECs regeneration studies.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله سپهر فیضی | s feizi
ophthalmic research center, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran
دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی (Shahid beheshti university of medical sciences)

زهراسهیلا سهیلی | zs soheili
موسسه ملی مهندسی ژنتیک و فن آوری زیستی

ابوذر باقری | a bagheri
shahid beheshti university of medical sciences
تهران- پاسداران- بوستان نهم- خیابان پایدارفرد خیابان امیر ابراهیمی - پلاک 23- مرکز تحقیقات چشم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی (Shahid beheshti university of medical sciences)

سحر بالاقلی | s balagholi
shahid beheshti university of medical sciences
تهران- پاسداران- بوستان نهم- خیابان پایدارفرد خیابان امیر ابراهیمی - پلاک 23- مرکز تحقیقات چشم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی (Shahid beheshti university of medical sciences)

سایه کریمی اول | s karimi aval
shahid beheshti university of medical sciences
تهران- پاسداران- بوستان نهم- خیابان پایدارفرد خیابان امیر ابراهیمی - پلاک 23- مرکز تحقیقات چشم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی (Shahid beheshti university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://www.binajournal.org/browse.php?a_code=A-10-24-95&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده چشم پزشکی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات