این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۲۱، شماره ۲، صفحات ۷۹-۸۴
عنوان فارسی بیان و تخلیص ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ ‌E‌ نوترکیب از یک ژن ‌صناعی
چکیده فارسی مقاله اهداف: نوروتوکسین‌های بوتولینوم، از قوی‌ترین سم‌های شناخته‌شده هستند که با مهار آزادسازی میانجی عصبی استیل‌کولین، موجب ایجاد فلج شل عضلانی می‌شود. طراحی مهارکننده‌ها هنوز به‌عنوان یک راهبرد اصلی برای مهار درون‌سلولی مسمومیت‌های ناشی از سموم مذکور به‌شمار می‌آید. برای بررسی پتانسیل عملکرد مهارکننده‌های طراحی‌شده، به سم خالص یا ناحیه کاتالیتیک آن نیاز است. هدف مطالعه حاضر، بررسی بیان و تخلیص ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E BoNT/E)) نوترکیب از یک ژن صناعی بود. مواد و روش‌ها: در مطالعه تجربی حاضر، توالی زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E از بانک ژن به‌دست آمد و بهینه‌سازی کدونی براساس E. coli BL21 انجام شد. سایر بررسی‌های بیوانفورماتیک لازم برای بیان بهتر ژن صورت گرفت. توالی ژن برای سنتز و همانندسازی در وکتور pET28a(+) سفارش داده شد. وکتور نوترکیب داخل باکتری E. coli BL21 انتقال و بیان پروتئین با ایزوپروپیل‌تیو-بتا-دی‌گالاکتوزیداز (IPTG) القا شد. برای بیان محلول، در شرایط بیانی تغییر صورت گرفت. سپس به‌وسیله کروماتوگرافی تمایلی و فیلتر آمیکون پروتئین خالص‌سازی شد. برای بررسی بیان و خالص‌سازی پروتئین SDS-PAGE و برای تایید پروتئین بیان‌شده تکنیک وسترن‌بلات به‌کار رفت. یافته‌ها: شاخص سازگاری کدون ژن به 0/85 افزایش یافت. ساختار سوم پیش‌بینی‌شده کیفیت مناسب را نشان داد. ساختار mRNA نشان داد، ساختار پیش‌بینی‌شده پایدار بود. بیان محلول پروتئین در شرایط °C18 به‌مدت 18ساعت با القای IPTG، یک‌میلی‌مولار به‌دست آمد. تولید پروتیئن و با خلوص بالای 90% تایید شد. نتیجه‌گیری: بهینه‌سازی شرایط بیان پروتئین زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E موجب تولید محلول آن در محیط کشت توسط میزبان E. coli BL21 می‌شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Expression and Purification of Recombinant Catalytic Domain of ‎Botulinum Neurotoxin Type E from a Synthetic Gene
چکیده انگلیسی مقاله Aims: Botulinum neurotoxins are the strongest known bacterial toxins that cause muscle paralysis due to inhibition of acetylcholine release. Design of inhibitors is still pursued as a major strategy for intracellular inhibition of poisoning caused by these toxins. Investigation of the potential function of design inhibitors, pure poison or catalytic area is essential. The aims of present study were expression and purification of recombinant catalytic domain of botulinum neurotoxin type E (BoNT/E) Type E from a synthetic gene. Materials and Methods: In this experimental study, the sequence of the botulinum neurotoxin type E light chain was adopted from GeneBank and codons were optimized according to E.coli BL21 (DE3) codon usage. Other bioinformatics tools were exploited to reach the optimum expression of the gene in the mentioned host. The resultant (gene) was then ordered to synthesize and cloning in pET28a (+) expression vector. The recombinant vector was transferred into E. coli BL21 (DE3) host cells. The expression of the protein was induced by addition of IPTG. The expression conditions were changed to obtain a soluble expression of the protein. Then, the protein was purified by an affinity chromatography, followed by a further purification with amicon filter. SDS-PAGE was used to evaluate expression and purification of the protein and Western blotting was performed to confirm the expressed protein. Finding: Codon Adaptation Index of the gene increased to 0.85. The third predicted structure showed good quality. The thermodynamic analysis of the mRNA structure showed that the predicted structure is stable. The soluble expression was obtained in 18°C and 18h induction by 1 mM IPTG. Protein production with higher more than 90% purity was confirmed. Conclusion: Optimization of the protein expression conditions resulted in producing the solution in the culture medium by E. coli BL21 as host.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله سیدمجتبی آقایی | S.M. Aghaie ‎
Biological Research Department, Basic Sciences Faculty, Imam Hossein University, Tehran, Iran‎
گروه تحقیقات زیست‌شناسی ، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

سیدجعفر موسوی | S.J. Mosavi ‎
Biological Research Department, Basic Sciences Faculty, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه تحقیقات زیست‌شناسی ، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

فیروز ابراهیمی | F. Ebrahimi ‎
Biological Research Department, Basic Sciences Faculty, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه تحقیقات زیست‌شناسی ، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

محمدباقر صالحی | M.B. Salehi
Biological Research Department, Basic Sciences Faculty, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه تحقیقات زیست‌شناسی ، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

شهرام نظریان | Sh. Nazarian
Biological Research Department, Basic Sciences Faculty, Imam Hossein University, Tehran, Iran
گروه تحقیقات زیست‌شناسی ، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://journals.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-19930-1&slc_lang=fa&sid=30
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/159/article-159-729665.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات