مجله دانشگاه علوم پزشکی اردبیل، جلد ۱۲، شماره ۴، صفحات ۴۰۸-۴۱۷
عنوان فارسی کلون، بیان و تخلیص پروتئین P۶۴۷-۱۵۳هموفیلوس آنفلوانزا
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: همـوفیلوس آنفلوانزا، باسیل گرم منفی است که بخشی از میکروفلور نازوفارنکس را در اغلب افراد تشکیل داده و سویه های مختلف آن در دو گروه کپسولدار (قابل طبقه بندی) و بدون کپسول (غیرقابل طبقه بندی) مورد مطالعه قرار می­گیرد. پروتئین غشاء خارجی P6 ، نوعی ایمونوژن حفاظت شده و پایدار درمیان سویه­های فاقد کپسول و نیز سویه‏های کپسولدار هموفیلوس آنفلوانزا می­باشد و خود بعنوان کاندید مناسبی جهت واکسیناسیون علیه هموفیلوس آنفلوانزا مطرح گردیده است. هدف از این مطالعه، تولید و تخلیص آنتی­ژن نوترکیب P6 به عنوان یک پروتئین حامل در واکسنهای کونژوگه می­باشد. روش کار: قطعه­ای به طول324 جفت باز از بخش انتهای ژن کد کننده پروتئین P6 در حامل پلاسمیدی pJET1.2 و متعاقبا در pET28a(+) کلون شد. القای تولید پروتئین با یک میلی مولار IPTG صورت گرفت و تخلیص آن با حل کردن اجسام سلولی در اوره، جذب با رزین نیکل، حذف اوره با شیب کاهشی اوره در محلول های شستشو و نهایتا جمع آوری پروتئین نوترکیب به شکل محلول در ایمیدازول انجام شد. حذف ایمیدازول با دیالیز در برابر بافرفسفات نمکی صورت پذیرفت. پروتئین نوترکیب P647-153 با استفاده از آنتی سرم پلی کلونال خرگوشی ضد هموفیلوس آنفلوانزا با استفاده از روش وسترن بلات تایید گردید. یافته ها: پروتئین نوترکیب P647-153 در میزبان E. coli BL21(DE3) با موفقیت بیان و تخلیص گردید (حدود 4 میلی گرم درهر لیتر کشت مایع LB ). ساختار آنتی­ژنی پروتئین نوترکیب P6 نیز با استفاده از ایمونوبلاتینگ تأیید شد. نتیجه گیری: نتایج وسترن بلات به موازات نتایج تعیین توالی، حاکی ازصحت تولید پروتئین P647-153 نوترکیب و حفظ نسبی ساختار اپی ‌ توپی آن می­باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله هموفیلوس آنفلوانزا، کلون و بیان، P647-153
عنوان انگلیسی Cloning, Expression and Purification of P647-153 of Haemophilus influenzae
چکیده انگلیسی مقاله Background & Objectives: Haemophilus influenzae is a Gram-negative bacterium that is part of the normal nasopharyngeal flora of most humans. H. influenzae strains were defined in two categories: encapsulated (typeable) and non-capsulated (nontypeable) strains. Outer membrane protein P6 is a highly conserved and stable protein in the outer membrane of both encapsulated and non-capsulated strains of H. influenzae. As an immunogen, P6 protein is a potential candidate vaccine against H. influenzae strains. The aim of this study was to produce recombinant protein P6 as a carrier protein for production of conjugate vaccines. Methods: The sequence (324 bp) coding P647-153 protein of H. influenzae was successfully cloned in pJET1.2 and subsequently in pET28a (+). Expression of the recombinant protein was induced with 1mM IPTG. Recombinant P647-153 was purified through dissolving inclusions in 8M urea buffer, absorbing to Ni-NTA resins, washing by buffers with decreasing urea concentration and finally eluted in Imidazole solution. Imidazole was removed by dialysis against PBS (pH 7.4). The recombinant p6 47-153 was confirmed by western blot analysis using rabbit anti H. influenzae polyclonal antiserum. Results: The recombinant P647-153 was successfully expressed in E. coli BL21 (DE3) and purified (4 mg /lit of broth culture). The immunoblotting showed that recombinant P647-153 conserved its native antigenic structure. Conclusion: Western blot results, along with that of sequencing, confirmed accurate production of recombinant P647-153 and partially retention of its conformational epitopes.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Haemophilus influenzae, P647-153, Cloning and Expression
نویسندگان مقاله فرشاد نجومی | farshad nojoomi


اشرف محبتی مبارز | ashraf mohabati mobarez


علی هاتف سلمانیان | ali hatef salmanian


سید داور سیادت | seiyed davar siadat


نیما خرم آبادی | nima khoramabadi


هانیه آقابابا | haniyeh aghababa


نشانی اینترنتی http://jarums.arums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-27-53&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده تخصصی
نوع مقاله منتشر شده مقاله اصیل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات