این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۹، شماره ۱، صفحات ۱۴۵-۱۵۲
عنوان فارسی کلون‌کردن DNA و بیان پروتئین آلفا- سینوکلئین در باکتری اشریشیاکلی
چکیده فارسی مقاله اهداف: شناخت ساختار و عملکرد پروتئین آلفا- سینوکلئین می‌تواند زمینه‌ساز توسعه روش‌های درمانی مناسب علیه بیماری پارکینسون باشد. هدف پژوهش حاضر، کلون‌کردن DNA و بیان پروتئین آلفا- سینوکلئین در باکتری اشریشیاکلی بود.
مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربی حاضر، توالی کدکننده آلفا- سینوکلئین موجود در پلازمید نوترکیب pRK172، به کمک روش PCR و با استفاده از پرایمرهای مناسب تکثیر شد. DNA سنتزشده توسط آنزیم‌های محدودگر SalI وHindIII بریده و در حامل‌ pET28a کلون و پلازمید نوترکیب به روش کلسیم کلراید به سویه بیانی باکتری اشریشیاکلی (BL21) منتقل شد. بیان آلفا-سینوکلئین توسط محلول IPTG القا و بیان پروتئین نوترکیب با روش الکتروفورز SDS-PAGE ارزیابی شد. ردیف‌سازی توالی‌ها به کمک الگوریتم ClustalW با برنامه BioEdit 5.0.9 صورت پذیرفت.
یافته‌ها: در محصولات واکنش‌های برش آنزیمی DNA و پلازمید pET28a با آنزیم‌های محدودگر، اندازه قطعات، نشان‌دهنده صحت واکنش‌های آنزیمی بود. DNA تکثیرشده و پلازمید pET28a مورد استفاده به‌ترتیب با طول‌های 407 و 5369 نوکلئوتید بودند. ترجمه حاصل از توالی قطعه کلون‌شده، تشابه 100% با پروتئین آلفا- سینوکلئین انسانی را نشان داد. در بیان پروتئین نوترکیب در قیاس با نمونه‌های شاهد منفی، افزودن IPTG موجب افزایش بیان پروتئین آلفا- سینوکلئین در تمامی نمونه‌ها به‌ویژه 2 ساعت پس از القا شد. بیشتر آلفا- سینوکلئین بیان‌شده از پلازمید pET28a-alpha-Synuclein به‌صورت اجسام گنجانده در باکتری تجمع یافتند.
نتیجه‌گیری: پروتئین آلفا- سینوکلئین در پلازمید pET28a کلون و تشکیل اجسام گنجانده توسط آلفا- سینوکلئین به‌هنگام بیان از سامانه pET28a-alpha-Synuclein تایید می‌شود و راه را بر تولید این پروتئین در مقیاس بالا هموار می‌سازد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله پارکینسون،آلفا- سینوکلئین،کلونینگ،واکنش زنجیره‌ای پلیمراز،مهندسی ژنتیک،
عنوان انگلیسی DNA Cloning and Expression of alpha-Synuclein Protein in E. coli
چکیده انگلیسی مقاله Aims: Identifying the structure and function of alpha-Synuclein protein can lead to the development of appropriate treatments for Parkinson disease. The aim of the current study was to investigate DNA cloning and the expression of alpha-Synuclein protein in E. coli.
Materials and Methods: In this experimental study, the sequence of encoding alpha-Synuclein in pRK172 recombinant plasmid was amplified by Polymerase Chain Reaction (PCR), using best primers. The synthesized DNA was, then, digested by restriction enzymes and cloned into pET28a and recombinant plasmid was transferred into the expression strain of E. coli (BL21) by Calcium Chloride method. The expression of alpha-Synuclein gene was induced by Isopropyl-Beta-D-Thiogalactoside (IPTG) and the expression of alpha-Synuclein was investigated by SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) method. Sequencing was done, using the ClustalW algorithm by the BioEdit 5.0.9 program.
Findings: In products of DNA enzymatic digestive reactions and pET28a plasmid with restriction enzymes, the size of the fragments indicated the correctness of the enzymatic reactions. The synthesized DNA and pET28a plasmid were 407 and 5369 nucleotides, respectively. The translation of the sequence of the cloned fragment revealed a 100% similarity to the human alpha-Synuclein protein. In expressing the recombinant protein in comparison with negative control samples, adding IPTG increased the expression of alpha-Synuclein protein in all samples, especially 2 hours after induction. Most of alpha-Synuclein expressed from the pET28a-alpha-Synuclein plasmid accumulated in the bacteria as incorporated objects.
Conclusion: The alpha-Synuclein protein is cloned into the pET28a plasmid and formation of the objects incorporated by alpha-Synuclein is confirmed by the expression of the pET28a-alpha-Synuclein system and paves the way for producing this protein in high scale.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله پارکینسون,آلفا- سینوکلئین,کلونینگ,واکنش زنجیره‌ای پلیمراز,مهندسی ژنتیک
نویسندگان مقاله سارا شیخی |
گروه زیست‌شناسی سلولی- ملکولی، دانشکده زیست‌شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

مهریار امینی‌نسب |
گروه زیست‌شناسی سلولی- ملکولی، دانشکده زیست‌شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

بابک صفاری |
گروه زیست‌شناسی سلولی- ملکولی، دانشکده زیست‌شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

سپیده عبدی |
گروه زیست‌شناسی سلولی- ملکولی، دانشکده زیست‌شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

نشانی اینترنتی https://biot.modares.ac.ir/article_22403_1920f247216b65a5c1b287d86901d4b6.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات