فصلنامه پژوهشی خون، جلد ۱۴، شماره ۱، صفحات ۵۳-۶۴
عنوان فارسی جداسازی، همسانه‌سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی 
چکیده فارسی مقاله چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(HSCs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta بود. Rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می‌رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و روش‌ها مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلول‌های Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده­ SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-32a در E.coli TOP 10 همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید ‌شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت ‌شد. بیان SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد. یافته‌ها توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلول‌های Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-32a همسانه‌سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد. نتیجه‌گیری در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئین‌های یوکاریوتی با کدون‌های نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می‌شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله کلمات کلیدی، گلیکوزیلاسیون، سلول بنیادی، PCR
عنوان انگلیسی Isolation, cloning and expression of human stem cell factor using prokaryotic expression system 
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Background and Objectives Stem cell factor (SCF) is a 28-40 kDa glycoprotein which plays an important role for the proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells (HSCs). SCF binds to the C-kit receptor, and improves the survival of HSCs in vitro. SCF is one of the essential supplements for cultivation of HSCs in vitro. It plays a vital role to increase the number and size of HSC colonies. Materials and Methods In this experimental study, glycosylation of SCF does not seem to influence its biological activity; therefore, it would be possible to produce it in prokaryotic expression system. The aim of this study was isolation, cloning and expression of SCF in the Rosetta expression host. In addition to the features of prokaryotic expression system, Rosetta was expected to provide rare codons of eukaryotic proteins and increase the recombinant protein expression level. Results The SCF coding sequence was isolated and amplified using the specific primers and cloned in E.coli TOP10 using pET-32a expression vector. The recombinant construct was confirmed by PCR, digestion and sequencing. The recombinant vector was transformed to the expression host, Rosetta. Conclusions The SCF coding sequence was successfully isolated and cloned into the expression vector pET-32a, followed by recombinant protein expression in Rosetta host strain.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Key words, Glycosylation, Stem cell, PCR
نویسندگان مقاله مهسا نایب هاشمی | m. nayebhashemi
high institute for research and education in transfusion medicine
مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون

مهشید محمدی پور | m mohammadi pour
high institute for research and education in transfusion medicine
مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون

حسین فهیمی | h. fahimii
pharmaceutical sciences branch of islamic azad university iaups
دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

مهریار حبیبی رودکنار | m habibi roudkenar
high institute for research and education in transfusion medicine
دانشکده پزشکی دانشگاه گیلان

محمدعلی جلیلی | mohammad ali jalili
high institute for research and education in transfusion medicine
مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون

نشانی اینترنتی http://bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1093-1&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/45/article-45-329162.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده biotechnology|
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات