این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۰، شماره ۱۸۲، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی بهبود بیان پروتئین اینترفرون بتای انسانی در سیستم بیان‌گذرای سلول‌های CHO DG۴۴ با ایجاد یک تغییر در اولویت کدونی توالی ناپایدار کننده‌ی انتهای ژن اینترفرون بتا (CRID)
چکیده فارسی مقاله مقدمه: بهینه سازی تولید اینترفرون بتا در سلول های CHO (Chinese hamster ovary) به عنوان یک میزبان بیانی که قادر به تولید پروتئین دارویی با کیفیت بالا می باشد، جهت کاهش قیمت و سرعت تولید این پروتئین نوترکیب دارویی از اهمیت زیادی برخوردار است. هدف این مطالعه، بررسی تأثیر پایداری mRNA به واسطه ی ایجاد یک تغییر در اولویت کدونی در ناحیه ی ناپایدارکننده ی انتهای پروتئین اینترفرون بتا (CRID یا Coding region instability determinant) و بررسی اثر این موتاسیون ها بر روی میزان بیان گذرای سلول های CHO به عنوان فاکتوری در راستای بهبود بیان ژن بود. روش ها: با استفاده از جدول اولویت کدونی (هامستر چینی) Cricetulus griseus 4 موتاسیون مورد نیاز برای ایجاد یک اولویت کدونی در توالی CRID ژن اینترفرون بتای انسانی طراحی شد. با روش SOEing PCR (Polymerase chain reaction-splicing by overlapping extension) در ناحیه ی CRID از ژن اینترفرون بتا موتاسیون های مورد نظر ایجاد شد و به وسیله ی کیت ®Express in درون سلول های CHO ترانسفکت گردید. میانگین میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های CHO ترانسفکت شده با ژن موتانت اینترفرون بتا با استفاده از کیت ELISA مخصوص این ماده با میانگین میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های CHO ترانسفکت شده با ژن طبیعی مقایسه گردید. یافته ها: موتاسیون های انجام شده به وسیله ی بررسی ژل و توالی یابی قطعات حاصل تأیید گردید. موتاسیون های حاصل جهت ایجاد یک اولویت کدونی در توالی CRID پس از تراسفکت کردن ژن موتانت در سلول های CHO سبب افزایش معنی دار 9/2 برابری (05/0 > P) در میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های CHO ترانسفکت شده با ژن موتانت نسبت به میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های CHO ترانسفکت شده با ژن طبیعی گردید. نتیجه گیری: موتاسیون های مدنظر با موفقیت انجام گردید و نشان داده شد که انجام این جهش ها در توالی ناپایدار کننده ی انتهایی CRID می تواند به صورت معنی داری باعث افزایش پایداری و در نتیجه افزایش غلظت اینترفرون تولید شده در محیط کشت شود. این موتاسیون ها جدید بودند و تأثیر قابل توجه آن ها نیز به اثبات رسید. در مجموع، نتایج این تحقیق جالب توجه و کاربردی به نظر می رسد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله اینترفرون بتا، واکنش زنجیره ای پلی مراز، Codon Bias، CRID
عنوان انگلیسی Improvement of Interferon-Beta Production in Transient Expression System of CHO DG44 by a Codon Bias Change in Instability Sequence (CRID) of C-terminal of Interferon Beta Gene
چکیده انگلیسی مقاله Background: Improvement of mRNA stability and therefore, production of interferon beta (IFNb) in Chinese hamster ovary (CHO) cell, as a recombinant protein expression system, is very important. The aim of this study was to investigate this effect by creating a codon bias change in instability sequence located in C-terminal of interferon beta protein (Coding region instability determinant or CRID). Methods: Mutations were designed in 4 points, according to codon bias table of Cricetulus griseus , using polymerase chain reaction/splicing by overlapping extension (SOEing PCR) method inside the CRID of interferon beta gene. The concentration of interferon beta in the medium of Chinese hamster ovary cell was determined using ELISA test kit. Findings: The mutations were verified by gel-electrophoresis and sequencing the resultant DNA. The mutations in resulted in a significant (2.9 times) increase in interferon-b concentration (P < 0.05). Conclusion: The mutations in CRID could significantly increase the stability of mRNA and the resultant Interferon b concentration in the medium. These mutations were novel and their effectiveness was proved.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله زهرا بزی | zahra bazi
گروه علوم تشریحی و بیولوژی ملکولی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

حسن کربکندی | hassan korbekandi
استادیار، گروه ژنتیک و بیولوژی ملکولی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

بتول هاشمی بنی | batool hashemi bani
استادیار، گروه علوم تشریحی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

زهره حجتی | zohreh hojjati
گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه اصفهان (Isfahan university)

امین مرادی حسن آباد | amin moradi hassan abad
گروه علوم تشریحی و بیولوژی ملکولی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

محمدرضا مراثی | m r maracy
دانشیار، گروه آمار و اپیدمیولوژی، دانشکده ی بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/1815
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318539.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات