این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۰، شماره ۱۸۸، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی شناسایی مارکر درون سلولی سیتوکراتین ۱۸ به وسیله‌ی فلوسایتومتری در سلول‌های نکلئوس پالپوزوس دیسک بین مهره‌ای انسانی و مقایسه‌ی توان تکثیر و مورفولوژی این سلول‌ها در داربست‌های بیوپلیمری آلژینات و کیتوسان-ژلاتین
چکیده فارسی مقاله مقدمه: دژنره شدن دیسک بین مهره ای در اثر کاهش تعداد سلول ها، کاهش تولید و تخریب ماتریکس خارج سلولی بافت دیسک بین مهره ای به خصوص در ناحیه ی نکلئوس پالپوزوس (NP) ایجاد می شود. در مهندسی بافت از داربست های طبیعی و غیر طبیعی مختلف برای ترمیم و رژنره شدن دیسک بین مهره ای استفاده می گردد. داربست های مورد استفاده باید تخریب پذیر و زیست سازگار باشند و محیط مناسبی برای تکثیر و مهاجرت سلول ها فراهم کنند. کیتوسان-ژلاتین و آلژینات از داربست های طبیعی خوبی هستند که برای این منظور مناسب هستند. برای شناسایی سلول های NP مارکر و روش خاصی وجود ندارد ولی بعضی مطالعات گزارش هایی از بیان بالای مارکرهای سیتوکراتین 19، 18 و 8 توسط تکنیک های Real time و ایمنوسیتوشیمی در سلول های NP منتشر کرده اند. هدف از این مطالعه شناسایی سلول های NP دیسک بین مهره ای انسانی توسط فلوسایتومتری مارکر سیتوکراتین 18، مقایسه ی میزان بقا، تکثیر و مورفولوژی سلول های NP در دو داربست آلژینات و کیتوسان-ژلاتین بود. روش ها: سلول های NP با تجزیه ی آنزیمی کلاژناز از بافت NP بیماران مبتلا به فتق دیسک بین مهره ای در بیمارستان الزهرای (س) اصفهان تهیه شد. محلول کیتوسان با محلول ژلاتین مخلوط شد. پس از ایجاد ارتباط بین این دو محلول توسط گلوتارآلدیید، مخلوط حاصل پس از فریز کردن و Freeze-drying به عنوان داربست مورد استفاده قرار گرفت. داربست آلژینات نیز تهیه گردید. پس از تأیید NP بودن سلول های جدا شده توسط فلوسایتومتری کردن مارکر درون سلولی سیتوکراتین-18، سوسپانسیون سلولی حاوی سلول های NP جدا شده به دو داربست منتقل گردید و تا 21 روز کشت داده شدند. برای بررسی درصد سلول های زنده و میزان تکثیر از تکنیک های تریپان بلو و MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-Yl)-2,5-Diphenyltetrazolium bromide] استفاده گردید. برای اثبات وجود منافذ و بررسی ساختار داربست و مورفولوژی سلول ها نیز از میکروسکوپ SEM (Scaning electron microscop) استفاده شد. یافته ها: نتایج فلوسایتومتری نشان داد که 60 سلول زنده مارکر سیتوکراتین 18 را بیان می کنند. نتایج MTT نیز نشان داد که درصد سلول های زنده در روز سوم نسبت به روز اول در هر دو داربست آلژینات و کیتوسان-ژلاتین اختلاف معنی داری داشت. همچنین درصد سلول های زنده از روز 3 تا 21 به صورت معنی داری کاهش یافت. نتایج شمارش سلول ها نشان داد که اختلاف میانگین تعداد سلول ها در داربست آلژینات به صورت معنی داری بیشتر از داربست کیتوسان-ژلاتین بود (001/0 > P). نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که می توان از مارکر سیتوکراتین 18 توسط فلوسایتومتری برای شناسایی سلول های NP استفاده نمود. همچنین داربست آلژینات نسبت به داربست کیتوسان-ژلاتین محیط مناسب تری برای رشد و تکثیر سلول های NP انسانی در in vitro فراهم می کند. پیشنهاد می شود از این داربست برای کشت سلول های NP در in vivo استفاده گردد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Recognition of Cytokeratin 18 Marker by Flow Cytometry of Nucleus Pulposus Cells in Human Intervertebral Disc and Comparison of Proliferation and Morphology of these Cells in Chitosan-Gelatin and Alginate Scaffolds
چکیده انگلیسی مقاله Background: Low back pain is a major economical and social problem nowadays. Intervertebral disc herniation and central degeneration of disc are two major reasons of low back pain that occur because of structural impairment of discs. Intervertebral disc includes the annulus fibrosus, transitional region, and nucleus pulposus (NP). NP forms the central nucleus of the disc. Reduction of cell count and extracellular matrix, especially in NP, causes disc degeneration. Different scaffolds (natural and synthetic) have been used for tissue repairing and regeneration of intervertebral disc in tissue engineering. Most scaffolds have biodegradable and biocompatible characteristics and also prepare a fine condition for proliferation and migration of cells. Although no specific marker or method has been suggested for recognition of NP cells, some studies have used real time and immunocytochemical methods and reported high expression of cytokeratin 19, 18, 8, and others as markers for NP cells. This study aimed to recognize NP cells of human intervertebral disc by flow cytometry of cytokeratin 18 marker. It also compared the proliferation and morphology of these cells in chitosan-gelatin scaffold and alginate scaffold. Methods: NP cells were derived by enzymatic hydrolysis of collagenase from NP tissue of patients undergoing open surgery for discectomy in Alzahra Hospital (Isfahan, Iran). Chitosan was blended with gelatin and glutaraldehyde was used for cross linking of the two polymers. Then, alginate scaffold was prepared. After approving the NP cells by flow cytometry of cytokeratin 18 marker, a cellular suspension with 4×10 5 cells was transferred to each scaffold and cultured for 21 days. Cell viability and proliferation were investigated by trypan blue and methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. A scanning electron microscope (SEM) was used to assert the porosity and to survey the structures of the scaffolds. Findings: We can use flow cytometry of cytokeratin 18 markers for recognition of NP cells. MTT assay demonstrated that cell viability on the third day had significant difference with the first day in both scaffolds. There was also a significant reduction in cellular viability from day 3 to day 21. Results of cell count showed that mean difference between cell counts in alginate scaffold was significantly more than chitosan-gelatin scaffold (P < 0.001). Conclusion: Flow cytometry of cytokeratin 18 can be used as a method for recognition of NP cells. Compared to chitosan-gelatin scaffold, alginate scaffold prepared a better condition for proliferation of NP cells. The results of this study suggested that alginate scaffold could be useful in in-vivo studies and treatment.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مسعود قربانی | m ghorbani
دانشجوی دکتری، گروه مهندسی بافت، دانشکده ی فناوریهای نوین، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی تهران (Tehran university of medical sciences)

بتول هاشمی بنی | batool hashemi bani
استادیار، گروه آناتومی و بیولوژی ملکولی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

حمید بهرامیان | hamid bahramian
استادیار، گروه آناتومی و بیولوژی ملکولی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

زینب کریمی | zeinab karimi
دانشجوی پزشکی، دانشکده ی پزشکی و کمیته ی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

سعید زمانی | saeed zamani
دانشجوی دکتری، گروه آناتومی و بیولوژی ملکولی، دانشکده ی پزشکی و کمیته ی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

سید احمد میرحسینی | seyed ahmad mirhosseini
استاد، گروه جراحی مغز و اعصاب، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

سید حمید زرکش اصفهانی | seyed hamid zarkesh esfahani
دانشیار، گروه ایمونولوژی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/1675
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318509.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات