این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۱، شماره ۲۲۶، صفحات ۱۵۰-۱۶۰
عنوان فارسی ساخت و ارزیابی یک سازه‌ی DNA بیان‌کننده‌ی پروتئین Core ویروس هپاتیت C متصل به آنتی‌ژن S ویروس هپاتیت B به عنوان یک کاندید واکسن
چکیده فارسی مقاله مقدمه: با وجود این که ویروس هپاتیت C (Hepatitis C virus یا HCV) یکی از عوامل مهم ایجاد کننده ی بیماری های مزمن کبدی می باشد، هنوز واکسن مناسبی برای آن تهیه نشده است. هدف از این مطالعه، ساخت یک سازه ی بیان کننده ی توالی C‏ore (aa: 1-122) ویروس هپاتیت C متصل به آنتی ژن S ویروس هپاتیت B (HBsAg یا Hepatitis B surface antigen) و تأیید بیان آن در سلول های یوکاریوتی بود. روش ها: در ابتدا توالی Core این ویروس با استفاده از پرایمرهای دارای جایگاه برش آنزیمی BamHI/EcoRV از روی وکتور pIVEX2.4a حاوی این ژن تکثیر شد و در وکتور pCDNA3.1 حاوی HBsAg خطی شده با آنزیم های مذکور کلون گردید. ارزیابی و تأیید ساختار نوترکیب به وسیله ی برش آنزیم های محدودکننده و در نهایت تعیین توالی صورت گرفت. پلاسمید ساخته شده ی نهایی (pCHCORE) در رده ی سلولی HEK293T ترانسفکت شد و ارزیابی نهایی بیان توسط تست Western blot بر روی سلول های HEK293T ترانسفکت شده به وسیله ی آنتی بادی پلی کلونال آنتی HBsAg موشی انجام شد. یافته ها: توالی ژن (122-1)Core ویروس هپاتیت C با موفقیت تکثیر گردید و نتایج ارزیابی، برش آنزیمی و تعیین توالی تأییدکننده ی صحت ساختار نوترکیب pCHCORE و کلونینگ انجام شده بود. نتیجه ی Western blot بیانگر انتقال موفق پلاسمید و بیان ژن هدف در سلول های یوکاریوتی بود. نتیجه گیری: با توجه به ساخت و بیان موفقیت آمیز ساختار HBS-core در سلول های یوکاریوتی و به دلیل احتمال افزایش پاسخ های ایمنی توسط آنتی ژن HBS به صورت فیوژن با پروتئین Core (بر اساس تحقیقات قبلی)، سازه ی بیانی حاوی ژن Core ویروس هپاتیت C متصل شده به این آنتی ژن، ممکن است باعث القای بیشتر پاسخ های ایمنی علیه پروتئین Core شود و بتواند به عنوان واکسن مؤثر به منظور کنترل عفونت HCV به کار رود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Construction and Evaluation of DNA Vaccine Encoding Fusion Protein of Hepatitis C Virus Core Protein and Hepatitis B Surface Antigen as a Vaccine Candidate
چکیده انگلیسی مقاله Background: While hepatitis C virus (HCV) is the major cause of acute and chronic hepatitis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma worldwide, no vaccine against this infection has been proved to date. Cellular immune responses play an important role for eradicating persistent viral infections. Among different vaccine strategies, the use of DNA vaccine has been shown to be a promising approach for enhancing cellular immune responses. In spite of their advantages, DNA-based vaccines might induce weaker antibody and cytotoxic T-lymphocyte responses compared to protein immunization. To overcome this obstacle, several methods such as different immunization regimens, fusion of particle forming units [like hepatitis B surface antigen (HBsAg)] and co-expressing cytokines have been tested. The aim of this study was to design, construct, and evaluate an HBsAg-fused core-based DNA vaccine against HCV infection. Methods: The HCV core gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned in BamHI/EcoRV sites of pcDNA3.1 containing HBsAg. The constructed plasmid (pCHCORE) was analyzed by restriction enzyme and sequencing analyses and evaluated for the protein expression in HEK293T cell line by western blot analysis with anti-HBsAg polyclonal antibody. Findings: The correctness of the constructed DNA vaccine was shown by restriction enzyme analysis and sequencing. Western blotting results confirmed the expression of HBsAg-HCV fusion protein with an expected molecular weight in HEK239T cell line. Conclusion: In accordance with previous studies, the constructed vector (pCHCORE) compromising the fusion of HBsAg to HCV core in pCDNA3 plasmid might be used as a HCV DNA vaccine (due to proper expression in cell lines) to induce augmented cellular immune responses.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مریم یزدانیان | maryam yazdanian
دانشجوی دکتری، گروه بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

آرش معمارنژادیان | arash memarnejadian
استادیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

حسین خان احمد شهرضا | hossein khan ahmad shahreza
استادیار، مرکز تحقیقات بیماری های ارثی کودکان، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان و بخش تحقیقات bcg، مجتمع تولیدی و تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

حوریه سلیمانجاهی | hoorieh soleimanjahi
دانشیار، گروه ویروس شناسی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

فاطمه متولی | fatemeh motevalli
کارشناس ارشد، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فرزین روحوند | farzin roohvand
دانشیار، بخش ویروس شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/2556
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318286.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات