این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۱، شماره ۲۳۴، صفحات ۵۴۴-۵۵۷
عنوان فارسی کلونینگ و بیان دومین III پروتئین پوششی ویروس دنگی نوع ۲ در باکتری E. coli
چکیده فارسی مقاله مقدمه: هدف این مطالعه بیان آنتی ژن نوترکیبی از پروتئین پوششی ویروس دنگی، به منظور دست یابی به بیان بیشتر و به شکل محلول بود. بنابراین، قابلیت بیان دومین III این پروتئین در میزبان باکتریایی بررسی گردید. روش ها: هم ردیفی توالی های مختلف دومین III با استفاده از نرم افزار Megalign انجام شد. پیش بینی ساختار پروتئین با نرم افزار Modeller و بهینه سازی توالی ژن برای بیان در E. coli با نرم افزار Optimizer صورت گرفت. سنتز و کلونینگ ژن در حامل pET21a و بهینه سازی بیان پروتئین نوترکیب در E. coli انجام شد. برای تخلیص پروتئین از ستون های کروماتوگرافی Ni-NTA استفاده گردید. کارایی بیان پروتئین با روش های الکتروفورز و لکه گذاری وسترن بررسی شد. یافته ها: یک توالی مورد توافق برای دومین III پروتئین پوششی سروتیپ 2 ویروس دنگی، ایجاد شد. ویژگی های ساختاری پروتئین هدف با استفاده از روش های بیوانفورماتیکی ارزیابی شد. با هدف دستیابی به بیان بالا، توالی ژن از لحاظ الگوی به کارگیری کدون و درصد GC بهینه سازی گردید. توالی ژن هدف با استفاده از روش های توالی یابی و هضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت. به منظور ایجاد پیوند دی سولفیدی در ساختار پروتئین، از میزبان بیانی Origami (DE3) استفاده شد. در نهایت بهینه سازی شرایط بیان پروتئین هدف انجام شد و غلظت مناسبی از پروتئین نوترکیب به صورت محلول به دست آمد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که بهینه سازی توالی دومین III منجر به تولید محصول پروتئینی با غلظت بالا (20 میلی گرم در لیتر محیط کشت) گردید. این سیستم بیانی می تواند جهت تولید دومین III پروتئین پوششی ویروس دنگی استفاده شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ویروس دنگی، نوترکیب، پروتئین پوششی
عنوان انگلیسی Cloning and Expression of Domain III of Dengue Virus Type 2 Envelope Protein in Escherichia Coli
چکیده انگلیسی مقاله Background: The aim of this study was production of a recombinant antigen from envelope protein of dengue virus, in order to achieve high level expression in soluble form. Therefore, the possibility of envelope protein domain III expression in bacterial host was studied. Methods: Multiple sequence alignment for domain III sequences was carried out using Megalign software. The Modeller and Optimizer software were used for protein structure prediction and sequence optimization. After gene synthesis and subcloning in the pET21a expression vector, the optimization of recombinant protein expression was carried out in Escherichia coli . Ni-NTA chromatography columns were used for protein purification. The efficiency of protein expression was analyzed using electrophoresis and western blotting methods. Findings: A consensus sequence for domain III of dengue virus type 2 envelope protein was provided. The structural properties of target protein were predicted using bioinformatics methods. For high expression level, the sequence of EDIII2 gene was optimized for appropriate codon usage and GC content. The coding gene sequence was approved by sequencing and enzymatic digestion. For disulfide bound formation in protein structure, the Origami (DE3) expression host was used. At the final step, expression of target protein was optimized, and a high concentration of recombinant protein was achieved in soluble form. Conclusion: The results of this study showed that the optimization of domain III sequence led to obtain high concentration (20 mg/l) of produced protein. This expression system can be used for production of dengue virus envelope protein domain III.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Dengue virus, Recombinant, Envelope protein
نویسندگان مقاله حسین فهیمی | hossein fahimi
دانشجوی دکتری، گروه ژنتیک، دانشکده ی علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مجید صادقی زاده | majid sadeghi zadeh
استاد، گروه ژنتیک، دانشکده ی علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مهشید محمدی پور | mahshid mohammadi pour
دانشجوی دکتری، گروه ژنتیک، دانشکده ی علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/2623
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318246.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات