این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۱، شماره ۲۵۱، صفحات ۱۳۹۲-۱۴۰۴
عنوان فارسی بیان و تخلیص DNA پلیمراز Pfu متعلق به خانواده‌ی B
چکیده فارسی مقاله مقدمه: DNA پلیمرازها آنزیم هایی هستند که سنتز مولکول DNA را از دئوکسی ریبونوکئوتیدها بر عهده دارند. این آنزیم ها ابزارهای ضروری در زیست شناسی مولکولی به حساب می آیند. DNA پلیمراز Pfu از یک آرکئوباکتری گرمادوست که در رسوبات دریایی با دمای 100-90 درجه ی سلسیوس زندگی می کند، جدا گردیده است. این آنزیم، خصوصیت اگزونوکلئازی 3 به 5 را دارد که باعث اصلاح خطاهای ناشی از همانندسازی DNA می شود. روش ها: در این مطالعه، قطعه ی کد کننده ی ژن DNA پلیمراز Pfu در ناقل بیانی b15-pET کلون گردید. سپس با تغییر شرایط بیان مانند غلظت IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)، زمان و دمای القا، بیان این آنزیم بهینه شد. در نهایت در شرایط بهینه، پروتئین در مقیاس بالا تهیه و به روشی ساده تخلیص گردید. سپس آنزیم تخلیص شده، جهت بررسی فعالیت در واکنش PCR (Polymerase chain reaction) به کارگرفته شد. یافته ها: کلونی هایی بعد از ترانسفورماسیون پلاسمید نوترکیب ایجاد شد که اکثر آن ها حاوی پلاسمید بودند. بیان آنزیم Pfu باندی را در حدود KD 90 در ژل الکتروفورز SDS-PAGE (Sodium do decyl sulfate- Polyacrylamide gel electrophoresis) نتیجه داد. بیشترین میزان تولید پروتئین با غلظت 75/0 میلی مولار ماده ی القا کننده ی IPTG، دمای 37 درجه ی سلسیوس و 3 ساعت پس از القا مشاهده شد. نتیجه گیری: تخلیص پروتئین با به کارگیری روشی جدید بر مبنای پروتکل Desai منجر به ایجاد محصولی شد که در واکنش PCR فعالیتی مشابه با نمونه ی تجاری داشت.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله DNA پلیمراز وابسته به DNA، PCR، کلونینگ، b15-pET
عنوان انگلیسی Expression and Purification of Pfu DNA Polymerase Belonging to the B Family Polymerase
چکیده انگلیسی مقاله Background: DNA polymerases are enzymes directing the synthesis of DNA molecules from deoxyribonucleotides. They are essential tools for molecular biology. Pfu DNA polymerase was initially isolated from Pyrococcus furiosus , anaerobic hyperthermophilic archaeon lived in geothermally heated marine sediments with temperatures between 90°C and 100°C. This enzyme possesses 3´ to 5´ exonucleotic activity; so that makes correcting the errors made in DNA replication. Methods: In this research, the DNA fragment encoding Pfu DNA polymerase was cloned in to pET-15b expression vector. Then, by changing expression conditions such as isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) concentration, and time and temperature of the induction, the expression of this enzyme was optimized. Finally, Pfu DNA polymerase was produced in large scale in optimized conditions and purified with simple method. Then, purified enzyme was used in polymerase chain reaction (PCR) for evaluating the activity. Findings: Transformation of recombinant vector produced some colonies that most of them have the plasmid. The expression of Pfu DNA polymerase resulted in a bond approximately 90 kDa in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Maximum amount of protein production was observed in IPTG concentration of 0.75 mM, at 37°C, 3 hours incubation. Conclusion: Protein purification with using the method based on Desai protocol caused a product that had the activity like commercial one in PCR reaction.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله زهرا خلیلی بروجنی | zahra khalili boroujeni
دانشجوی داروسازی، دانشکده ی داروسازی و علوم دارویی و کمیته ی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

داریوش عابدی | dariush abedi
دانشیار، گروه بیوتکنولوژی دارویی، دانشکده ی داروسازی و علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

مهدی عباسیان | mehdi abbasian
کارشناس ارشد، گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده ی کشاورزی، دانشگاه صنعتی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه صنعتی اصفهان (Isfahan university of technology)

محمدرضا مفید | mohammad reza mofid
استادیار، گروه بیوشیمی بالینی و مرکز تحقیقات بیوانفورماتیک، دانشکده ی داروسازی و علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/2966
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318160.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات