این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۲، شماره ۲۷۹، صفحات ۳۷۸-۳۸۷
عنوان فارسی مطالعه‌ی بیوانفورماتیکی و بررسی بیان ژن بهینه ‌شده‌ی زیر واحد B کلرا توکسین به عنوان کاندید واکسن
چکیده فارسی مقاله مقدمه: وبا بیماری خطرناکی است که توسط باکتری ویبریوکلرا ایجاد می شود. توکسین کلرا مهم ترین عامل ویرولانس در بیماری زایی ویبریو کلرا می باشد. زیر واحد B انتروتوکسین (CtxB یا Cholera toxin subunit B) که مسؤول اتصال سم به سلول یوکاریوتی است، ویژگی های ایمونوژنیک دارد. هدف از این تحقیق، بررسی بیوانفورماتیکی و تولید پروتئین نوترکیب (CtxB) بود. روش ها: ژن CtxB به لحاظ وجود کدون های نادر مورد بررسی قرار گرفت و بهینه سازی ژن با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. پلاسمید نوترکیب a/CtxB28pET به سلول های 3DE 21BL E.coli (Escherichia coli) منتقل و بیان پروتئین با استفاده از IPTG (thiogalactopyranoside-1-Isopropyl β-D) القا گردید. بیان پروتئین با روش SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate- Polyacrylamide gel electrophoresis) وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. پروتئین نوترکیب به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی Ni-NTA (Nickel-Nitrilotriacetic acid) تخلیص گردید. یافته ها: شاخص سازگاری کدون (CAI یا Codon adaptation index) مربوط به ژن طبیعی 61/0 بود؛ در حالی که ژن بهینه سازی شده شاخص 92/0 را داشت. درصد کدون های با شیوع بالا در ژن به 67 درصد بهبود یافت. آنالیز آنزیمی صحت همسانه سازی ژن CtxB در وکتور a/CtxB28pET را تأیید کرد. وسترن بلاتینگ واکنش اختصاصی پروتئین نوترکیب با آنتی بادی ضد توکسین کلرا را نشان داد. میزان پروتئین خالص شده برای هر لیتر از محیط، 9 میلی گرم بود. نتیجه گیری: بهینه سازی ژن CtxB روش مناسب برای بیان بالای پروتئین نوترکیب می باشد. این پروتئین را می توان به صورت کپسوله شده به منظور ایمنی زایی خوراکی تولید کرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Bioinformatical Study and Evaluation of Expression of Cholera Toxin Subunit B Optimized Gene as a Vaccine Candidate
چکیده انگلیسی مقاله Background: Cholera is a lethal diarrheal disease caused by Vibrio cholerae. Cholera toxin is the major virulence factor in pathogenesis of Vibrio cholerae. The B subunit of the enterotoxin, which is responsible for toxin binding to eukaryotic cells, has immunogenic properties. The aim of this study was bioinformatic investigation and production of recombinant cholera toxin subunit B (CtxB). Methods: CtxB gene was analysed for rare codons and gene optimization was performed using optimization software. Recombinant pET28a/ctxb plasmid was transformed to E. coli BL21 DE3 and expression was induced with Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG). The protein expression was evaluated using Sodium dodecyl sulphate- Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western Blotting analysis. The recombinant protein was purified using Nickel-Nitrilotriacetic acid (Ni–NTA) affinity chromatography. Findings: Codon adaptation index (CAI) on the native gene was 0.61, while the optimized sequence had a CAI of 0.92. Percentage of codon having high-frequency distribution was improved to 67%. Restriction analysis confirmed cloning of the CtxB gene into pET28a vector. Western blotting showed specific reactivity of recombinant protein with anti-CTX antibody. The total yield of purified protein was 9 mg/l. Conclusion: The results indicated that CtxB gene optimization is a useful approach to high-level expression of recombinant protein. The protein could be produced in capsulated form for oral immunization purpose.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله شهرام نظریان | shahram nazarian
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده ی علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

محمدعلی عارف پور | mohammad ali aref pour
دانشجوی دکتری، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده ی علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

محمدجواد باقری پور | mohammad javad bagheri pour
دانشجوی دکتری، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده ی علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

غلامرضا اولاد | gholamreza olad
پژوهشگر، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/3777
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318014.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات