این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۲، شماره ۲۸۲، صفحات ۵۳۴-۵۴۳
عنوان فارسی جداسازی پلاسماسل از خون محیطی و هم‌کشتی با سلول استرومای مغز استخوان به منظور کشت طولانی مدت
چکیده فارسی مقاله مقدمه: فن آوری تهیه ی آنتی بادی بر پایه ی تک سلول B روشی نوین در تهیه ی آنتی بادی مونوکلونال انسانی محسوب می گردد. مهم ترین بخش این فن آوری، کشت طولانی مدت پلاسماسل جدا شده از خون جهت ترشح آنتی بادی است. با توجه به این که دلیل زنده ماندن طولانی مدت پلاسماسل ها در مغز استخوان حضور سیگنال های اطراف آن ها است، جهت کشت پلاسماسل در شرایط In vitro لازم است این سیگنال ها به واسطه ی حضور یک لایه سلول تغذیه کننده تأمین شوند. به نظر می رسد که از میان انواع مختلف این سلول ها، سلول های استرومای مغز استخوان (BMSCs یا Bone marrow stromal cells) گزینه ی مناسب تری جهت هم کشتی با پلاسماسل محسوب می گردند. هدف از این پژوهش، جداسازی پلاسماسل های ترشح کننده ی آنتی بادی از خون محیطی و زنده نگهداشتن آن ها در شرایط In vitro می باشد. روش ها: پس از تزریق واکسن کزاز، تیتر آنتی بادی در سرم خون افراد داوطلب با روش ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) اندازه گیری شد. PBMCs (Peripheral blood mononuclear cells) جدا شده از خون فرد ایمن با آنتی بادی های رنگی اختصاصی سه نشانگر سطحی 45CD، 19CD و 38CD رنگ آمیزی شدند. پس از آن پلاسماسل ها به روش FACS (Fluorescence-activated cell sorting) از سایر جمعیت های سلولی موجود، جدا و در پلیت 96 خانه ای Sort شدند. سپس همراه با یک لایه BMSCs کشت داده شدند. پس از گذشت 10 روز، از پلاسماسل ها RNA استخراج شد و واکنش RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن آنتی بادی انجام شد. یافته ها: روز ششم پس از واکسیناسیون، تیتر آنتی بادی سرم، IU/ml 16 به دست آمد که نشان از پاسخ ایمنی بسیار مناسب در مقابل واکسن کزاز بود. همچنین، آنالیز فلوسایتومتری نمونه ی خون محیطی فرد ایمن شده در روز هفتم، درصد پلاسماسل موجود در PBMCs را حدود 3/0 درصد نشان داد. در نتیجه ی انجام واکنش RT-PCR با پرایمرهای اختصاصی ژن آنتی بادی، قطعه ی VH (Variable heavy chain) به طول bp 400 تکثیر شد. این نتیجه، زنده بودن پلاسماسل ها و همچنین بیان ژن آنتی بادی را در روز دهم در شرایط هم کشتی با BMSCs تأیید نمود. نتیجه گیری: حاصل این پژوهش، فراهم آوردن شرایط مناسب به منظور کشت پلاسماسل برای مدت 10 روز در محیط In vitro بود. بنابراین بخشی از فن آوری نوین تهیه ی آنتی بادی بر پایه ی تک سلول B نیز پایه گذاری شد. نتایج به دست آمده در این پژوهش شامل درصد پلاسماسل موجود در PBMCs و اندازه ی قطعه ی ژنی VH تکثیر شده، با سایر مطالعات انجام شده در این زمینه مطابقت داشت.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Isolation of Peripheral Blood Plasma Cells and Co-Culture with Bone Marrow Stromal Cells in Order to Long-Term Culture
چکیده انگلیسی مقاله Background: Single B cell antibody technology is a novel strategy to make human monoclonal antibody (mAb). Its main part is long-term culture of primary plasma cells (PC) to secrete antibody. PC survival in bone marrow is related to environmental signals, which should supply using a feeder cell monolayer during in-vitro culture of PCs. It seems that among different kinds of feeder cells, bone marrow stromal cells (BMSCs) are the best. The aim of this study was isolation of antibody secreting plasma cells from peripheral blood and surviving them during in-vitro culture. Methods: After tetanus vaccination, Ig concentrations of serum samples were titrated using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method. Isolated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of vaccinated donor were stained with three fluorescent anti CD38, anti CD19 and anti CD45 antibodies. Stained plasma cells were sorted into 96 wells using fluorescence-activated cell sorting (FACS) and cultured with BMSCs as feeder cell. After 10 days, in order to determine plasma cell survival, total RNA were extracted from plasma cells and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) method was performed using antibody specific primers. Findings: 7 days after vaccination, the serum antibody titration of donor was 16 IU/ml, which confirmed provoking a good immune response against tetanus vaccination. Flow analysis of peripheral blood sample on seventh day showed the presence of 0.3% plasma cells in PBMCs. Using RT-PCR with primers specific for antibody gene, the amplification of a variable heavy chain (VH) gene segment with the size of 400 bp was done; this confirmed the plasma cells survival and antibody gene expression during co-culture with BMSCs. Conclusion: The main result of this project was finding suitable pattern to isolate and survive plasma cells during 10 days in-vitro culture. Therefore, a part of single B cell antibody technology was established. Some of the results consist of percentage of plasma cells in PBMCs and the size of VH segment are in agreement with previous studies.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله معصومه بزاز | masoumeh bazaz
کارشناس ارشد، پژوهشکده ی علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه صنعتی مالک اشتر (Malek ashtar university of technology)

جلیل فلاح مهرآبادی | fallah mehrabadi j
استادیار، پژوهشکده ی علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه صنعتی مالک اشتر (Malek ashtar university of technology)

مهدی مهدوی | mehdi mahdavi
استادیار، گروه ایمنی شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

مهدی زین الدینی | mehdi zain aldini
استادیار، پژوهشکده ی علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه صنعتی مالک اشتر (Malek ashtar university of technology)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/3644
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318000.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات