این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی، جلد ۲، شماره ۷، صفحات ۲۷-۳۴
عنوان فارسی کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی Zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (PAE) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و pH بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (DMF)، متانول، اتانول، اتیلن گلایکول و ایزوپروپانول مورد مطالعه قرار گرفت. مواد و روشها: تایید گونه باکتری با تستهای بیوشیمیایی شامل سیترات، SIM، MR-VP و TSI انجام شد. DNA ژنومی توسط کیت استخراج و با پرایمر اختصاصی بوسیله PCR ژن الاستاز بدست آمد. کلونینگ در وکتور pET21a(+) با مکان های برش HindIII و NdeI صورت گرفت. ترانسفورماسیون به روش شیمیایی انجام شد. سپس سلول ها در محیط LB تحت القای IPTG 1mM قرار گرفته و زمان و شرایط تولید بهینه گردید. یافته ها: بدنبال تایید گونه باکتریایی توسط تستهای بیوشیمیایی، DNA ژنومی استخراج شد و سپس ژن PAE به کمک پرایمر اختصاصی توسط PCR جدا شد. ژن الاستاز که بصورت پری پرو الاستاز کد می شود، درون وکتور) pET21a(+ کلون و در باکتری E. coli سویه BL21 ترانسفورم گردید. آنالیز سکانس نوکلئوتیدی ژن یک چارچوب خوانش (ORF) دارای 1497 جفت باز که 497 آمینواسید را کد می کند نشان داد. بدنبال القاء به کمک IPTG آنزیم فعال در درون سلول یافت شد. سپس آنزیم توسط کروماتوگرافی تمایلی تخلیص گردید. بررسی خصوصیات آنزیم از قبیل دمای بهینه، pH بهینه و غیر فعال سازی حرارتی برگشت ناپذیرانجام شد و همچنین فعالیت آنزیم در حضور حلالهای آلی بررسی گردید و بخوبی نشان داده شد که آنزیم مذکور از مقاومت و فعالیت بسیار بالایی در حلالهای آلی برخوردار است. نتیجه گیری:آنزیم الاستاز سویه PTCC 1430 در مقایسه با آنزیم سویه PAO1، که ساختار کریستالی آن تعیین شده، تنها یک تغییر در ناحیه سیگنال را نشان می دهد. خصوصیات بیوشیمیایی نشان می دهد که الاستاز یک آنزیم با پایداری زیاد در حلال های آلی است.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Cloning, Gene Expression, Purification and Characterization of Elastase from Pseudomonas Aeruginosa
چکیده انگلیسی مقاله Aim and Background. Pseudomonas Aeruginosa Elastase is an important enzyme in basic studies on Zn-metalloproteases and is also considered as a virulence factor of the bacterium. In the present study, the gene encoding Pseudomonas aeruginosa elastase (PAE) was extracted and clone, Following expression and purification, its biochemical properties including optimal temperature and pH, and also enzymatic activity in the presence of glycerol, dimethylformamide (DMF), methanol, ethanol, ethylene glycol and isopropanol were investigated. Materials and Methods. Bacterial strain was verified by biochemical tests including citrate, SIM, MR-VP and TSI. Genomic DNA was extracted using gene extraction kit and elastase gene was amplified by PCR using two specific primers. Cloning was carried out within pET21a (+) vector with HindIII and NdeI restriction sites and transformation accomplished by chemical method. The cells were cultured under the given optimized conditions, in LB medium with 1mM IPTG. Results. Following the strain verification by biochemical tests, genomic DNA was extracted and PAE encoding gene was isolated using specific primers. Elastase gene, which is encoded as pre-proelastase, was cloned within pET21 a (+) vector and transformed into E.coli strain BL21. Nucleotide sequence analysis shows an open reading frame (ORF) of 1497 nucleotides corresponding to 497 amino acid residues. Following the induction by IPTG, the active enzyme was detected in the soluble fraction. Consequently, the enzyme was purified using affinity chromatography. Enzyme properties such as optimal temperature and pH, irreversible thermo inactivation and organic solvent activity were investigated. Our results clearly indicate that the above mentioned enzyme possesses a noticeable activity and stability within organic media. Conclusion. Elastase from Pseudomonas aeruginosa strain PTCC1430 shows only one amino acid substitution in the signal sequence in comparison with that of strain PAO1 whose crystal structure is solved. Biochemical properties reveal that elastase is a highly stable enzyme in organic solvents.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله سمیه احتشام | somayeh ehtesham ehtesham
department of biology, faculty of sciences, islamic azad university, parand branch,tehran-iran
گروه زیست شناسی ، دانشکده علوم زیستی ، دانشگاه آزاد اسلامی واحدپرند، تهران،ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی پرند (Islamic azad university of parand)

سید محسن اصغری | s mohsen asghari
department of biology, faculty of science, university of guilan, guilan -iran
گروه زیست شناسی ، دانشکده علوم پایه ، دانشگاه گیلان، گیلان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه گیلان (Guilan university)

افسانه صدر ممتاز | afsaneh sadre momtaz
department of biology, faculty of science, university of guilan, guilan -iran
گروه زیست شناسی ، دانشکده علوم پایه ، دانشگاه گیلان، گیلان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه گیلان (Guilan university)

نشانی اینترنتی http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-23&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/1816/article-1816-284773.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوشیمی
نوع مقاله منتشر شده مقاله تحقیقی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات