این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۹، شماره ۲، صفحات ۵۳-۶۹
عنوان فارسی ساخت حامل ویروسی نوترکیب ناقل shRNA اختصاصی علیه ژن Fndc۵ موشی جهت انتقال به سلول های بنیادی جنینی
چکیده فارسی مقاله هدف: RNA مداخله‌گر یک مکانیسم کارآمد در کاهش بیان ژن‌ها و تعیین عملکرد ژن‌ها است. وکتورهای لنتی ویروسی ابزارهای مناسبی برای انتقال ژن‌های خارجی به طیف گسترده‌ای از سلول‌های پستانداران هستند. پروتئین Fndc5 یک پروتئین گلیکوزیله غشایی است که بیان آن طی روند تمایز قلبی و عصبی سلول‌های بنیادی جنینی موشی (mESCs) افزایش می‌یابد. در این مطالعه به بررسی قابلیت کاهش بیان ژن Fndc5 در mESCs با استفاده از وکتورهای لنتی ویروسی بیان کننده shRNA می‌پردازیم. روش‌ها: به این منظور دو توالی مشخص shRNA علیه ناحیه کد کننده رونوشت Fndc5 و یک توالی shRNA کنترل به عنوان کنترل منفی طراحی و سنتز شد. قطعات shRNA سنتزی پس از هیبرید شدن درون وکتور لنتی ویروسی در پایین دست پروموتر H1 القا شونده توسط تتراسایکلین کلون شدند. وکتور لنتی ویروس‌ نوترکیب درون سلول‌های HEK293T بسته بندی شد و mESCs توسط ذرات ویروسی ترانسداکت شدند. بیان shRNA در سلول‌های ترانسداکت شده توسط 48 ساعت تیمار با داکسی سایکلین القا گردید. نتایج: سنجش میزان بیان رونوشت Fndc5 توسط Real-time PCR در سلول‌های ترانسداکت شده با ویروس‌های نوترکیب حامل هر دو shRNA، کاهش بیان معنادار نسبت به گروه کنترل نشان داد. نتیجه‌گیری: در مجموع هدف قرار دادن ژن‌ Fndc5 از طریق مکانیسم RNA مداخله گر می‌تواند به عنوان یک ابزار کارآمد در کاهش بیان این ژن در لاین سلولی ترانسداکت شده به منظور بررسی عملکرد Fndc5 مورد توجه قرار بگیرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Construction of recombinant lentiviral vector containing shRNA against mouse Fndc5 gene in order to transduct of mouse embryonic stem cells
چکیده انگلیسی مقاله Objective: RNA interference (RNAi) is considered as a potential approach for knocking down of target genes and their functional assessment. Lentiviral vectors serve as an efficient tool for transducing of foreign genes in a wide variety of mammalian cells. Fibronectin type I domain-containing 5 (Fndc5) is a glycosylated membrane protein which is shown that its transcript levels to be increased during the neural and cardiac differentiation of mouse embryonic stem cells (mESCs). Here, we reported the efficacy of Fndc5 gene silencing in mESCs using lentiviral vectors expressing shRNA.Methods: Two distinct shRNA sequences targeting Fndc5 coding sequence (CDS) and one scramble shRNA sequence as a negative control were designed and commercially synthesized. Synthetic shRNA oligonucleotides were cloned into a lentiviral inducible vector after annealing downstream of the tetracycline inducible H1 promoter. The recombinant lentiviral vector was packaged in HEK293T cells, then mESCs were transduced by lentiviral particles. Expression of shRNA in transduced cell lines was induced by Doxycycline treatment for 48h. Results: Evaluation of transcript levels of Fndc5 by real-time PCR showed a significant decrease in transduced cells by a mixture of two shRNAs. Conclusion: Taken together, lentiviral-mediated RNA interference targeting Fndc5 gene could be considered as an efficient tool to silence the expression of the gene in transduced cell line to study the function of Fndc5.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Fndc5, shRNA, lentiviral vectors, RNAi
نویسندگان مقاله شیما ناظم |
department of molecular genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

کامران قایدی |
department of cellular biotechnology, cell science research center, royan institute for biotechnology, acecr, isfahan, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

صادق باباشاه |
department of molecular genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مجید صادقی زاده |
department of molecular genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

محمد حسین نصر اصفهانی | mohammad hossein nasr esfahani
department of cellular biotechnology, cell science research center, royan institute for biotechnology, acecr, isfahan, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

نشانی اینترنتی
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات