این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۲۳، شماره ۲، صفحات ۶۷-۷۴
عنوان فارسی سنجش لوسیفراز روشی برای نشان‌دادن صلاحیت میکروRNA let-۷bانتخابی در سرکوب تکثیر ویروس هپاتیت C
چکیده فارسی مقاله اهداف: توسعه عوامل ضدویروسی جدید رویکردی مناسب برای ریشه‌کن‌شدن عفونت هپاتیت C است. به‌دلیل عدم وجود مدل‌های حیوانی مناسب همواره سدی برای ارزیابی مناسب ترکیبات ضدویروسی در محیط زنده وجود دارد. توجه روزافزون به microRNAها نقطه قوت جدیدی در درمان‌های ضدویروسی محسوب می‌شود. هدف از مطالعه حاضر، استفاده از سنجش لوسیفراز برای تایید میان‌کنش بین miRNA و RNA ژنومی ویروس هپاتیت C (HCV) ژنوتیپ 1b به‌منظور سرکوب تکثیر این ویروس است. مواد و روش‌ها: قطعات ژنومی NS5B از ژنوم ویروس هپاتیت C به‌عنوان ناحیه MRE درون وکتور psiCHECK-2-TM ساب‌کلون شد. بیان نسبی وکتورهای لنتی‌ویروس بیان‌کننده miRNA در سلول Huh7.5 از طریق میکروسکوپ فلورسانس و real-time PCR ارزیابی شد. لنتی‌ویروس بیان‌کننده let-7b به سلول‌های Huh7.5 ترانسداکت شد. NS5B-psiCHECK-2-TM (MRE) به سلول Huh7.5 مورد نظر ترانسفکت شد. به کمک کیت سنجش دوگانه لوسیفراز بیان نسبی لوسیفراز اندازه‌گیری شد. یافته‌ها: با استفاده از لنتی‌ویروس‌های بیان‌کننده let-7b شرایط بیان بالا و دایمی از let-7b در سلول مورد نظر ایجاد شد. از سوی دیگر اتصال اختصاصی توالی پاسخ دهنده (NS5B) به میکروRNA let-7b با کاهش نور لوسیفراز نشان داده شد. نتیجه‌گیری: برای حفظ بیان بالا و پایدار میکروRNAها در سلول از وکتورهای لنتی‌ویروس استفاده می‌شود. استفاده از سنجش لوسیفراز یکی از مناسب‌ترین روش‌های تایید میان‌کنش بین miRNA-mRNA است که می‌تواند برای ژن‌های ویروسی دیگر با میکروRNAهای متفاوت استفاده شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله لوسیفراز، miRNA، HCV، لنتی‌ویروس
عنوان انگلیسی Luciferase Assay for Demonstrate the Competence of Selective MicroRNA of let-7b in Suppressing HCV Replication
چکیده انگلیسی مقاله Aims: The development of new antiviral agents is an appropriate approach to eradicate hepatitis C infection. Due to the lack of suitable animal models, there is always a barrier to the proper evaluation of antiviral compounds in vivo. The growing attention to microRNAs is a new strength in antiviral therapy. The aim of the present study was to use luciferase assay to confirm the specific interaction between miRNA and genomic RNA of hepatitis C virus (HCV) genotype 1b to suppress the replication of the virus. Materials & Methods: The NS5B genomic fragments of the HCV genome were sub-cloned into the psiCHECK-2-TM vector as MRE. The relative expression of lentivirus vectors expressing miRNAs in Huh7.5 cells was assessed through fluorescence microscopy and real-time PCR. The lentivirus expressing let-7b was transduced to Huh7.5 cells. The NS5B-psiCHECK-2-TM (MRE) was transfected to the Huh7.5 cell. The relative expression of luciferase was measured using a luciferase dual assay kit. Findings: With the use of lentiviruses expressing let-7b, high and permanent expression of let-7b was created in the target cell. On the other hand, the specific attachment of the responsive sequence (NS5B) to the microRNA of let-7b was shown by decreasing luciferase light. Conclusion: Lentiviral vectors are used to maintain high and stable expression of microRNAs in cells. The use of luciferase assay is one of the most appropriate methods to confirm the interaction between miRNA-mRNA that can be used for other viral genes with different microRNAs.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Luciferase,miRNA,HCV,Lentiviral
نویسندگان مقاله مریم شفاعتی | M. Shafaati
Department of Microbiology, Jahrom Branch, Islamic Azad University, Jahrom, Iran
گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران

مرضیه جمالی‌دوست | M. Jamalidoust
Alborzi Clinical Microbiology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran
مرکز تحقیقات میکروب‌شناسی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران

محمد کارگر | M. Kargar
Department of Microbiology, Jahrom Branch, Islamic Azad University, Jahrom, Iran
گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران

احسان عارفیان | E. Arefian
Department of Microbiology, School of Biology, College of Science, University of Tehran, Tehran, Iran
گروه میکروبیولوژی، دانشکده زیست‌شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

فرشید کفیل‌زاده | F. Kafilzadeh
Department of Microbiology, Jahrom Branch, Islamic Azad University, Jahrom, Iran
گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-54259-2&slc_lang=fa&sid=30
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات