این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۸، شماره ۵۷۲، صفحات ۲۶۰-۲۶۶
عنوان فارسی کلون، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H۱N۱ انسانی در رده‌ی یوکاریوتیک سلول حشره با استفاده از وکتور باکولوویروس
چکیده فارسی مقاله مقدمه: ویروس آنفلوانزا H1N1 به عنوان عامل بیماری‌زا و تهدید کننده‌ی حیات انسان مطرح می‌شود. واکسیناسیون، از راه‌های مؤثر برای پیش‌گیری و مهار بیماری آنفلوانزا است. تولید پروتئین نوترکیب هماگلوتینین در سیستم بیانی باکولوویروس، در بستر سلول یوکاریوت حشره (Sf9) به عنوان یک راهکار مؤثر پیشنهاد شده است. روش‌ها: توالی ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H1N1 از National Center for Biotechnology Information (NCBI) استنتاج و پس از طراحی پرایمر اختصاصی، توالی با استفاده از هضم آنزیمی در پلاسمید pFastBacHTA کلون گردید و برای تولید یک بکمید نوترکیب به سلول DH10Bac انتقال داده شد. پس از استخراج پلاسمید مربوط و تأیید صحت کار، به داخل سلول حشره ترانسفکت گردید و بعد از بیان پروتئین توسط سلول Sf9، با روش Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و Western blot، حضور پروتئین نوترکیب تأیید ‌شد. یافته‌ها: ژن هماگلوتینین با طول 654 جفت‌باز در پلاسمید pFastBacHTA به کمک دو آنزیم BamHI و Xhol ساب کلون گردید. سلول حشره بعد از دریافت بکمید نوترکیب، پروتئینی به وزن تقریبی 60 کیلودالتون را بیان نمود. پس از استخراج پروتئین، با روش‌های SDS-PAGE و Western blot تأیید انجام گرفت و با روش Lowry، غلظت پروتئین اندازه‌گیری شد. نتیجه‌گیری: سیستم بیانی باکولوویروس برای تولید پروتئین‌هایی با ساختار پیچیده مفید است. به طور کلی، از این طرح می‌توان به این نتیجه رسید که این پروتئین در سلول حشره به میزان بالایی بیان می‌شود و به دلیل تشابه سیستم آن با سیستم انسانی، می‌تواند در آینده به عنوان جایگزین مناسب برای تخم‌مرغ‌های جنین‌دار در زمینه‌ی واکسیناسیون مورد استفاده قرار گیرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ویروس آنفلوانزا نوع A، زیرگروه H1N1، هماگلوتینین، سلول Sf9، باکولوویروس،
عنوان انگلیسی Cloning, Expression, and Purification of the Recombinant Hemagglutinin of Human Influenza Virus H1N1 in the Eukaryotic Insect Cells Using Baculovirus Vector
چکیده انگلیسی مقاله Background: The H1N1 influenza virus is a highly pathogenic virus that threatens human life. Vaccination is an effective way of preventing and controlling influenza. Production of recombinant hemagglutinin in the baculovirus expression system, in the insect eukaryotic cell substrate (Sf9), has been suggested as an effective strategy. Methods: The H1N1 influenza virus hemagglutinin gene sequence was prepared from National Center for Biotechnology Information (NCBI). After designing a specific primer, the sequence was provided using restriction digestion, cloned into pFastBacHTA plasmid, and transferred to the DH10Bac cell to produce a recombinant bacmid. After extracting the relevant plasmid, it was transfused into the insect cell; and after the expression of the protein by Sf9 cell, the presence of recombinant protein was confirmed using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot methods. Findings: The hemagglutinin gene (654 bp) was cloned in pFastBacHTA plasmid using the two enzymes of BamHI and Xhol. Sf9 cell expressed a protein weighing approximately 60 kDa after receiving the recombinant bacmid protein. The extracted protein was identified and confirmed using SDS-PAGE and Western blot methods; and protein concentration was measured by Lowry method. Conclusion: The baculovirus system is useful for the production of proteins with complex structures. Generally, it can be concluded that this protein is highly expressed in insect cells. Due to the similarity of this system with the human system, it can be a suitable alternative for embryonic eggs in the future, and can be used in vaccination.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Influenza A virus,H1N1 subtype,Hemagglutinins,Sf9 cells,Baculovirus
نویسندگان مقاله نیلوفر راشدی |
استادیار مدعو، گروه زیست‌شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران و استادیار، بخش تحقیق و توسعه، مؤسسه‌ی تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

مرتضی تقی‌زاده |
استادیار، گروه زیست‌شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران

پریسا محمدی‌نژاد |
استادیار مدعو، گروه زیست‌شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران و استادیار، مرکز تحقیقات واکسن‌های نوترکیب، دانشکده‌ی داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران

مهدی مهدوی |
استادیار مدعو، گروه زیست‌شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران و استادیار، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران

رضا جلالی‌راد |


نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/12948
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-2481890.pdf
کد مقاله (doi) 10.22122/jims.v38i572.12948
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات