این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۶، شماره ۱، صفحات ۶۰-۷۰
عنوان فارسی کلونینگ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم ACC دآمیناز از باکتری سودوموناس فلورسنس
چکیده فارسی مقاله گروهی از باکتری‌های همزیست با گیاهان، تحت عنوان PGPR (باکتری های محرک رشد گیاهان) آنزیمی به نام ACC دآمیناز (EC4.1.99.4) را کد می‌کنند که این آنزیم، تنظیم کننده‌ی تولید اتیلن از طریق متابولیزه نمودن ACC (حد واسط بیوسنتز اتیلن) و شکستن آن به آمونیاک و α-کتوبوتیرات می‌باشد. این آنزیم نقش مهمی در تسهیل رشد گیاهان از طریق کاهش میزان اتیلن بخصوص در شرایط سخت محیطی دارد. بنابراین هدف این مطالعه، بیان، تخلیص و تعیین شرایط بهینه‌ی فعالیت آنزیم ACC-دآمیناز (ACCD) از سویه FY32 باکتری سودوموناس فلورسنس و بررسی خصوصیات سینتیکی این آنزیم می‌باشد. بدین منظور، ژن acdS از باکتری سودوموناس فلورسنس بومی جداسازی و در وکتور بیانی pET28 a(+) کلون شد و سپس وکتور نوترکیب pET28-acdS به باکتری E. coli سویه‌ی BL21(DE3) منتقل گردید. پس از مشاهده بیان، آنزیم ACCD توسط ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل-سفاروز تخلیص و سپس، شرایط بهینه‌ی فعالیت این آنزیم و خصوصیات سینتیکی آن مورد بررسی قرار گرفت. مشخص گردید که این آنزیم، در 7 pH: و دمای 28 درجه سانتی‌گراد بیشترین فعالیت را دارد. این آنزیم فعالیت بالایی را در حضور MgSO4 در مقایسه با سایر یون‌های فلزی مورد مطالعه نشان داد. همچنین کاهش فعالیت آنزیم در غلظت ppm 160 نمک NaCl معنی‌دار بود. با توجه به پارامترهای سینتیکی آنزیم یعنی Km (mM 66/9) و Vmax (nM α-ketobutyrate mg-1 h-1 11/0)، مشخص گردید که کارایی این آنزیم در مقایسه با ACCDهای شناخته شده قبلی نسبتا بالاست.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ACCدآمیناز، کلونینگ، کروماتوگرافی تمایلی، Vmax، Km،
عنوان انگلیسی Cloning, expression, purification and determination of biochemical properties of ACC deaminase from Pseudomonas fluorescence
چکیده انگلیسی مقاله Plant growth promoting bacteria produce ACC deaminase (EC4.1.99.4) which regulates the biosynthesis of ethylene through cleavage of ACC (immediate precursor of Ethylene) into -ketobutyarate and ammonia. Therefore, it has an important role in plant growth promotion via lowering indigenous ethylene levels especially when the plants are exposed to an environmental stress. Therefore, this study aimed to investigate the cloning, expression, purification and determination of biochemical properties of ACC deaminase from Pseudomonas fluorescense. In this regard, the ACC deaminase encoding gene of Pseudomonas fluoresense FY32 was isolated and cloned in pET28 a (+) and the resultant pET28/acdS construct then was transformed into E. coli BL21(DE3). The expressed enzyme was purified by metal-affinity chromatography on Ni(2+)-TED-Sepharose column and then the optimum conditions and biochemical properties of the purified enzyme was examined. This enzyme showed the highest activity at 28 °C, pH 7 in the presence of 30 mM MgSO4. Also, the significant reduction of ACC deaminase activity was observed in 160 ppm of NaCl. The Km and Vmax of enzyme were calculated to be 9.66 mM and 0.11 nM mg-1 h-1, respectively (determined by the concentration of the produced α-ketobutyrate), which were relatively higher than those previously reported.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله داود فرج زاده |
دانشگاه شهید مدنی آذربایجان
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهید مدنی (Azarbaijan shahid madani university)

نعمت سخندان بشیر | sokhandan bashir
دانشگاه تبریز
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تبریز (Tabriz university)

ناصر پولادی |
دانشگاه شهید مدنی آذربایجان
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهید مدنی (Azarbaijan shahid madani university)

نشانی اینترنتی http://biot.modares.ac.ir/article_13487_52aecb41bc63fd41eab6023a723203c2.pdf
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/899/article-899-187071.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات