این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
علمی شیلات ایران، جلد ۲۸، شماره ۴، صفحات ۷۱-۸۱
عنوان فارسی انتقال و بیان ژن GnRH نوترکیب ماهی در باکتری BL۲۱ E. coli به منظور تولید هورمون نوترکیب
چکیده فارسی مقاله هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (GnRH) یک نوروپپتید موثر در تنظیم فرآیند تولیدمثل در مهره‌‌داران می‌‌باشد. آنالوگ‌‌های مختلفی از این هورمون به فرم سنتتیک با نیمه عمرهای مختلف برای تکثیر مصنوعی آبزیان در بازار موجود می‌‌‌‌باشند. هدف از این تحقیق بررسی بیان GnRH نوترکیب در باکتری  Escherichia coliسویه  BL21به منظور تولید هورمون نوترکیب می‌‌‌‌باشد. در این تحقیق، توالی DNA مربوط به پپتید GnRH طراحی شده در وکتور بیانی pET28a+ کلون شد. واکنش زنجیره‌‌ای پلیمراز (PCR) به کمک آغازگرهای اختصاصی صحت کلونینگ را نشان داد. وکتور نوترکیب pET28a+/GnRH به باکتری بیانی E. coli BL21 (DE3) انتقال داده شد و صحت انتقال با کلونی PCR سنجیده شد و باند 186 جفت بازی حاصل از تکثیر ژن بر ژل آگارز مشاهده گردید. سپس برای بررسی بیان، باکتری نوترکیب در محیط Luria Bertani (LB) حاوی آنتی‌‌بیوتیک کانامایسین در دمای 37 درجه سانتی‌گراد کشت داده شد و با غلظت یک میلی‌‌مولار Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranpside (IPTG) القاء شد و بعد از القاء، باکتری در دو دما و زمان مختلف شامل 6 ساعت در دمای 37 درجه سانتی‌‌گراد و 24 ساعت در دمای 20 درجه سانتی‌‌گراد قرار گرفت. میزان بیان به کمک الکتروفورز ژل SDS-PAGE تعیین شد. بررسی SDS-PAGE نشان‌‌دهنده بیان پپتید بوده و باند هشت کیلودالتونی مربوط به پپتید مورد نظر بر روی ژل قابل مشاهده بود. همچنین میزان بیان پپتید در دمای 20 درجه سانتی‌‌گراد بیشتر از دمای 37 درجه سانتی‌‌گراد می‌‌باشد. با توجه به نتایج بدست آمده از تحقیق حاضر می‌‌توان نتیجه گرفت که هورمون GnRH قابلیت تولید در سیستم بیانی پروکاریوتی همانند اشریشیاکلی را دارد و پس از خالص سازی می‌‌تواند به‌‌عنوان یک همولوگ خاص برای درمان اختلالات تولید مثلی در آبزیان معرفی گردد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله GnRH، اشرشیاکلی، القای هورمونی، آبزیان
عنوان انگلیسی Transformation and gene expression study of recombinant fish GnRH in E. coli BL21 in order to produce recombinant hormone
چکیده انگلیسی مقاله Gonadotropin releasing hormone (GnRH) is a neuropeptide known to regulate reproduction in vertebrates. Different analogues of synthetic GnRH are used to induce final sexual maturation in fish breeders. The purpose of this research was to evaluate the expression of recombinant GnRH (rGnRH) in Escherichia coli BL21 to produce recombinant hormone. In the present research, the sequence of DNA related to designed fish GnRH was cloned in pET28a+. The cloning was confirmed by polymerase chain reaction (PCR) and specific primers. Recombinant vector pET28a+/GnRH was transformed into the expression host, E.coli BL21 (DE3). The transformation was confirmed using colony PCR. The transformed bacteria were cultured in LB medium containing kanamycin antibiotic at 37°C at overnight then, induced with 1 mM IPTG. After induction, the bacteria were cultured in two different times and temperatures including 37°C for 6 h and 20° C for 24 h. The protein expression was determined by SDS-PAGE analysis. A band of expected size (186 base pair) of amplification from the gene transmitted to the bacteria was detected on the agarose gel. The 8-kD band of peptide expression was observed in the SDS-PAGE gel and the expression level in 20° C for 24 h was higher than 37° C for 6 h.  The result showed that GnRH from fish had the possibility of producing in the prokaryotic expression system and after optimization, it can be introduced as a specific homologous for the treatment of reproductive disorders in fish.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله GnRH, E.coli, Aquatic animals, Hormonal induction
نویسندگان مقاله صدیقه محمدزاده | S. Mohammadzadeh
Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University
دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری

سکینه یگانه | S. Yeganeh
Fisheries Department, Faculty of Animal Sciences and Fisheries, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University, Sari, Iran


فاطمه مرادیان | F. Moradian


بهرام فلاحتکار | B. Falahatkar


سلواین میلا | S. Milla


نشانی اینترنتی http://isfj.ir/browse.php?a_code=A-10-1112-8&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/943/article-943-1721181.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوتکنولوژی و فرآوری های شیلاتی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات