طب جنوب، جلد ۱۷، شماره ۳، صفحات ۳۷۷-۳۹۰
عنوان فارسی بهینه نمودن تشخیص مولکولی کریپتوکوکوس نئوفورمنس با استفاده از کنترل داخلی
چکیده فارسی مقاله زمینه: نبود کنترل داخلی در پژوهش‌های انجام گرفته در زمینه PCR‌های تشخیصی محدودیتی مهم محسوب می‌گردد. به‌کارگیری تکنیک‌های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون PCR در تشخیص کریپتوکوکوزیس، ضروری است. روش‌های متنوعی برای تشخیص این قارچ بیماری‌زا وجود دارد. به‌طورکلی روش‌های مبتنی بر کشت، تکنیک‌های وقت‌گیر با حساسیت پایین هستند و نیازمند امکانات و تجربه کافی برای تفسیر نتایج می‌باشند و همچنین روش‌های رنگ‌آمیزی نیزحساسیت لازم را ندارند. در نتیجه روش‌های مولکولی از جمله PCR، تکنیک‌های مناسب‌تری برای شناسایی هستند. هدف این مطالعه طراحی و ساخت کنترل داخلی تکثیری پلاسمیدی (IAC) جهت شناسایی ممانعت کننده‌ها در آزمایش PCR کریپتوکوکوس نئوفورمنس (C.neo) و کاربردهای آتی در لابراتوارهای روتین تشخیصی بوده است. مواد و روش‌ها: در این بررسی برای ساخت کنترل داخلی، ابتدا پرایمرهای ویژه آزمایش PCR، بر مبنای هدف ژنی 16S rRNA جهت تشخیص مولکولی، بهینه و سپس حساسیت و ویژگی مشخص شد. پرایمرهای مرکب (Composite Primer) برای IAC-C.neo نیز طراحی، تکثیر و سپس کلون گردید. IAC-C.neo تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R الحاق و در باکتری اشریشیا کلی JM107 ترانسفورم و کلون گردید. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR با رقیق‌سازی و همچنین طیف پاسخ PCR همراه با IC مورد بررسی قرار گرفت یافته‌ها: اندازه محصول تشخیصی C.neo با پرایمرهای اختصاصی آن برابر با bp 415 و محصول IAC-C.neo برابر با 661 جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوب (246 جفت باز) را با هم دارند. تعداد حداقل IC در هر واکنش 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمایش PCR همراه با IC برای DNA کریپتوکوکوس نئوفورمنس بین 3 میلیون تا 100 عدد کریپتوکوکوس مشخص گردید. در آزمایش ویژگی با عوامل مختلف هیچ محصول ناخواسته‌ای مشاهده نشد. نتیجه‌گیری: علیرغم سرعت و دقت بالای تکنیک PCR، یافته‌های منفی و مثبت کاذب که به‌دلایل مختلف رخ می‌دهند از مشکلات مهم این تکنیک جذاب می‌باشد که می‌توانند کارایی آن را کاهش دهند. استفاده از یک کنترل داخلی در تشخیص مولکولی کریپتوکوکوس نئوفورمنس، این خطاها را شناسایی می‌نماید.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله کنترل داخلی تکثیری، کریپتوکوکوس نئوفورمنس، PCR
عنوان انگلیسی Improvement of the Molecular diagnosis of Cryptococcus neoformans using Internal Control (IC)
چکیده انگلیسی مقاله Background: Lacking of internal control in majority of the PCR realated searchesis one of the most important items yet. Using sensitive and specialized laboratory techniques such as PCR is necessary to cryptococosis diagnosis. Different methods to detect this pathogen exist. Generally, culturing based methods are time consuming and have low sensitivity and need enough experience and equipments to data analyzing. Further painting based methods have no sufficient sensitivity as well. As a result, molecular techniques such as PCR are more appropriate to diagnosis purposes, but different data gathered from non standard tests supposed to be one of the deficiencies of this powerful molecular technique. This aim of this study was to design and produce the plasmid amplification internal control (IAC) to identify the restrictors in Cryptococcus neoformans PCR test and its future applications in the routine diagnostic laboratories. Materials and methods: In this study to produce internal control, first the special PCR primers based on Gene target 16SrRNA for optimized molecular detection and then sensitivity and character were identified. Then, the composite primers for IAC C. neoformans was designed, replicated and clonized as well. The replicated IAC C. neoformans was attached to pTZ57R and transformed and colonized in E.coli JM107. The minimum IC number of each PCR reaction was studied using dilution and PCR reaction spectrum with IC. Results: The size of C. neoformans diagnostic product with its special primers was 415 bp and IAC C. neoformans amplicon is 661 bp, which have desired deference in the size (246 bp). The minimum IC number was identified 1000 in each reaction. The min/max sensitivity of PCR test with IC for C. neoformans DNA was identified between 100 particle to 3 million yeasts. There was no unwanted product in the character test with different agents. Conclusion: In spite of high rate and exclusivity of PCR technique, one of the main difficulties of this exacting method is the false positive and negative results which occur because of different reasons which may led to decrease its performance. Using an internal control for molecular diagnosis of Cryptococcus neoformans as inside controlling systemcan detect these errors.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Amplification internal control, Cryptococcus neoformans, PCR
نویسندگان مقاله محمدحسن شاه حسینی | mohammad hassan shahhosseiny
department of microbiology, shahr-e-qods branch, islamic azad university, tehran, iran.
گروه میکروبیولوژی، واحد شهر قدس، دانشگاه آزاد اسلامی تهران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی شهر قدس (Islamic azad university of shahr e qods)

شکوفه بگلری | shokoofeh beglari
department of biology, tehran science and research unit, islamic azad university, tehran, iran.
گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی تهران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

منصور بیات | mansoor bayat
department of medical amp;amp; veterinary specialized sciences, science amp;amp; research branch, islamic azad university, tehran, iran
گروه علوم دامپزشکی، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

الهام مسلمی | elham moslemi
iranian gene fanavar institute igf , tehran, iran.
مؤسسه ایرانیان ژن فناور igf ، تهران

محمد قهری | mohammad ghahri
iranian gene fanavar institute igf , tehran, iran.
مؤسسه ایرانیان ژن فناور igf ، تهران

نشانی اینترنتی http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-467&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده عمومی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات