Archives of Razi Institute، جلد ۶۶، شماره ۱، صفحات ۴۳-۴۹
عنوان فارسی مقایسه میزان رشد و تولید PRP بین جدایه های مختلف همافیلوس آنفلوآنزای تیپ (Hib) b در شرایط مختلف رشد.
چکیده فارسی مقاله همافیلوس آنفولانزای تیپ b باکتری است گرم منفی, پلئو مورفیک و مهمترین عامل مننژیت در کودکان زیر 5 سال به خصوص تا2 سال می باشد. در این مطالعه جدایه های مختلف Hib که از بچه های مشکوک به مننژیت جدا شده بودند با استفاده از روشهای مختلف میکروبی , بیوشیمیایی و سرولوژیکی تشخیص و مورد شناسایی قرار گرفتند . در این تحقیق محیط های مختلف کشت از جمله محیط مایع بهبود پیدا کرده و تهیه شده(GC medium Base GCB) در آزمایشگاه موسسه رازی ومحیط های تجاری( Brain Heart Infusion BHI) و ( TSB ) Trypticase Soy Broth برای مقایسه و انتخاب بهترین میزان رشد (bacterial biomass ) جدایه هامورد استفاده قرار گرفتند . به تمام محیط های مذکور 2 فاکتور مهم mg/lit 10 X (hemin) و ساپلیمنت IsovitalX حاوی فاکتور V به میزان /ml 01/0 که لازم برای رشد این میکرو ارگانیزم می باشد اضافه گردید . میزان رشد با شروع cfu 104 باکتری در هر لیتراز محیط کشت آغاز گردید. نتایج بدست آمده مقدار حجم رشدی بسیار نزدیکی را در محیط ها نشان داد اگرچه محیط GCB ( modified گردیده) میزان رشد بیشتری را نسبت به سایر محیط های تجاری داشت و این محیط برای رشد , استخراج و تخلیص PRP(CPS) استفاده گردید. در این مطالعه تولید PRP بر اساس تکنیک ها و امکانات موجود در بخش از جمله فنل کلروفرم بجای Ultrafiltration برای به حداقل رساندن موادی مانند اندوتاکسین ومواد پروتئینی استفاده گردید. همچنین کاهش بعضی از پروسه های شیمیایی و اضافه نمودن روش هایی از جمله استفاده از آنزیم هایی مانند Pronease و Phospholipase برای از بین بردن پروتئین باقیمانده و مواد فسفاتی در تخلیص PRP صورت گرفته و مقدار PRP حاصله با استفاده از روش بیال تعیین گردید. نتایج این مطالعات نشان داد اگر چه تفاوت چندانی در مقدار PRP بدست آمده در بین سه تا از سویه ها با مقدار متوسط mg/lit 108 مشاهده نگردید , اما سویه ATF2 مقدار PRP بسیاربالایی را ( mg/lit 192 ) نشان داد و همچنین پایین ترین مقدار PRP مربوط به سویه ( H.inf1 (16mg/lit بود . به نظر می رسد که داده های بدست آمده از آزمایش می توانند متعلق به یک جامعه نرمال با میانگین 4/106 و انحراف استاندارد 5/62 باشد . بنا به نتیجه ی آزمون یک نمونه ای کولموگروف اسمیرنوف فرضیه فوق تایید شد (P=0.5) . حال با مشاهده mg/lit 192≤ PRP مقدار تولید PRP تولید شده قابل توجه می باشد . مقدار پروتئین و نوکلئیک اسید موجود در PRP در طول موج های 280 و 260 نانومتر به ترتیب 10% و 5% تخمین زده شد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Comparison of bacterial biomass and PRP production between different isolation of Haemophilus influenza type-b (Hib) under different culture conditions
چکیده انگلیسی مقاله Heamophilus influenzae type-b (Hib) is a gram - negative pleomorphic bacterium that causes meningitis infections in children with the age of less than 5 years particularly in two years old infants. In the present study various isolates of Heamophilus influenzae from infants suspected to meningitis were collected, identified, characterized and were used throughout our experiments. Different culture media namely Brain Heart Infusion Broth (BHIB), Tryptic Soy Broth (TSB) and GC medium Base (GCB) which this medium was modified and prepared in our own laboratory, were compared to determine the highest bacterial yield. All media were added supplements 10mg/ml hemin & 0.01/ml IsovitaleX containing V factor. The bacterial yield for all Hib strains present in our laboratory were measured with an initial inoculums of 104 cfu per ml. The result showed very closed amount of biomass for all isolates however, GCB had slightly higher yield and ultimately we chose this medium for cultivation and extraction of capsular polysaccharide (CPS-b). In our laboratory we have adapted the PRP production according to our technical and instrumental availabilities which exists in our laboratories replacing ultra centrifugation to phenol chloroform to remove contaminants like endotoxin and proteins to the minimum level and also decreased the number of some chemical treatments while some steps were added in purification process. Our study showed although there were not significant differences between the PRP extract of the three isolates with average amount of 108 mg/lit, however, isolate ATCC10210 (ATF2) showed the highest amount with 192mg/lit and the least PRP was produced by isolate H.inf.1, with 16 mg/lit. It seems that the data can be categorized to a normal distribution with the mean of 106.4 and standard deviation of 6.25. This result was confirmed by one sample kolmogorov-Smirnov test, hence the PRP ≥192 mg/lit is statistically significant at a significant level of α =0.10 (P=0.085). The amount of contaminants e.g protein along with nucleic acid present in PRP was estimated at optical density 280 and 260nm, were under 10% and 5% respectively.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله
نشانی اینترنتی http://archrazi.areeo.ac.ir/article_103865_ba60b1d1aaf31ed4071e88b938634e95.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات