|
|
طب انتظامی، جلد ۲، شماره ۲، صفحات ۱۲۷-۱۳۶
|
|
|
| عنوان فارسی |
حذف ژن پروزامین سنتتاز در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev۱ بمنظور تولید سویه ضعیف شده |
|
| چکیده فارسی مقاله |
مقدمه: هدف از این مطالعه، انجام حذف ژنی در باکتری بروسلا ملی تنسیس Rev1 به منظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، بود. بدین منظور تلاش گردید تا ژن کدکننده آنزیم پروزامین سنتتاز(per) ، یکی از ژنهای درگیر در تشکیل ساختار زنجیره O از LPS دیواره باکتری، از طریق انجام نوترکیبی همساخت حذف گردد. مواد و روشها: نوترکیبی همساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذف که شامل ترادف نوکلئوتیدی کدکننده مقاومت آنتیبیوتیکی کانامایسین (kanR) بهمراه ترادفهای بالادست و پایین دست ژن per در طرفین آن بود، صورت گرفت. کاست حذف با انجام واکنشهای PCR سه مرحلهای با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ساخته شده و به منظور ساخت وکتور خودکشی، درون وکتور pBluescriptIISK(-) کلون گردید. انتقال وکتور خودکشی بدرون باکتری با روش الکتروپوریشن صورت گرفت. یافتهها: نتایج حاصل، صحت ساخت کاست حذف و وکتور خودکشی را تأیید کرد. به دنبال انتخاب سویه جهش یافته، حذف ژن per با انجام واکنشهای PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و تعیین توالی قطعه تکثیر یافته، مورد تأیید قرار گرفت. همچنین با مقایسه محصول واکنشهای RT-PCR انجام یافته با پرایمرهای اختصاصی از سویههای والد و جهش یافته، عدم بیان آنزیم پروزامین سنتتاز مورد تأیید قرار گرفت. بحث و نتیجهگیری: سویه حاصل یک سویه جهش یافته دارای نقص در ساختار LPS خود بوده که علاوه بر کاهش خطا در تمایز ما بین حیوان واکسینه شده و حیوان آلوده در تستهای تشخیصی، میتواند با انجام تستهای ایمنولوژیکی بعنوان یک سویه کاندید واکسن مورد بررسی قرار بگیرد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Deletion of Perosamine Synthetase Gene in Brucella Melitensis Rev1 to Generate the Attenuated Mutant Strain |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Background: The aim of this study was to employ gene knockout technique in Brucella melitensis Rev1 to attain the attenuated mutant strain. Therefore, we deleted the perosamine synthetase encoding gene (per), one of the LPS O-chain coding genes, by homologous recombination. Materials and Methods: Homologous recombination was performed using a suicide vector containing deletion cassette, which comprised kanamycin resistance sequence (kanR) flanking with the per upstream and downstream sequences. Deletion cassette was constructed by PCR reactions using specific primers, and cloned into pBluescriptIISK(-) to construct suicide vector. The suicide vector was transformed into Brucella by electroporation. Results: The results were confirmed deletion cassette and suicide vector construction. After mutant strain selection, deletion of the per gene was confirmed by PCR using specific primers, and sequencing. Also, loss of the per gene function was confirmed by comparison of RT-PCR products from wild type and mutant strain. Conclusion: The mutant Brucella had deficiency in its LPS O-chain structure, so in addition to reduce error in diagnostic tests to discriminate between vaccinated and infected animal, it can to characterize as a candidate vaccine with later immunological tests. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
علی رضا سعیدی نیا |
مهدی زین الدینی |
مسعود سلیمانی |
مجید صادقی زاده | majid sadeghi zadeh
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://teb.police.ir/teb/browse.php?a_code=A-10-188-1&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
فن آوری های مرتبط با طب انتظامی |
| نوع مقاله منتشر شده |
تحقیقی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|