مجله دانشگاه علوم پزشکی اراک، جلد ۱۰، شماره ۳، صفحات ۲۵-۳۵
عنوان فارسی اثر ایجاد موتاسیون V۳۶۴D در انتهای کربوکسیل کانال پتاسیمی ROMK۲ (Kir۱.۱b) بر روی روند آندوسیتوز آنها
چکیده فارسی مقاله مقدمه: مطالعات انجام شده نشان داده که آندوسیتوز کانال‌های پتاسیمی ROMK برای تنظیم ترشح K+ در قسمت‌های انتهای نفرون و مجاری جمع کننده مهم می‌باشد. در این مطالعه اثرات موتاسیون V364D بر پایداری کانال پتاسیمی ROMK2 هنگامی که در غشاء اووسیت بیان می‌شود بررسی گردیده است. روش کار: در این پژوهش تجربی اووسیت‌های Xenopus laevis به روش استاندارد با استفاده از کلاژناز جدا گردیدند.‍ با استفاده از روش quick-change در انتهای کربوکسیل کانال پتاسیمی ROMK2 موتاسیون زای مستقیم ایجاد گردید. cRNA که ROMK2 وموتاسیون V364Dرا کد می‌کرد، سه روز قبل از قرار دادن در محلول BFA (زمان صفر) به اووسیت‌ها تزریق می‌شد. به محیط کشت برفلدین A (+BFA) به مقدار 5-25 میکرومولار (مهار کننده انتقال پروتئین‌های ساخته شده به غشاء) یا اتانول به عنوان حلال BFA (BFA -) اضافه گردید. با استفاده از تکنیک ثابت نگه داشتن ولتاژ با استفاده از دو الکترود جریان یونی و پتانسیل استراحت غشاء اووسیت‌ها پس از بیان کانال‌های پتاسیمی ROMK2 و موتاسیون V364D اندازه‌گیری گردید. جهت تجزیه و تحلیل اطلاعات از آنالیز واریانس یک طرفه و تست تی آموزشی استفاده شد. نتایج: یافته‌های حاصل نشان داد اثر BFA بر روی میزان جریان به صورت وابسته دوز است. بر خلاف کانال‌های پتاسیمی ROMK2 اووسیت‌هایی که موتاسیون V354D را بیان می‌کردند در هیچ کدام از زمان‌های ثبت مورد نظر در طی دوره انکوبه شدن در BFA در هر دو غلظت 5 و 25 میکرو مولار کاهشی در میزان جریان یونی این کانال پتاسیمی دیده نشد. برای ROMK2 پس از این که اووسیت‌ها 48 ساعت تحت تأثیر BFA بودند میزان کسر جریان برابر با 05/0±24/0 (16=n) بود در حالی که برای موتاسیون V364D برابر با 09/0±17/1 بود. نتیجه گیری: نتایج، افزایش پایداری و توقف آندوسیتوز کانال‌های پتاسیمی ROMK2 غشاء با ایجاد موتاسیون V364D را نشان می‌داد. بنابر این باید بین انتهای کربوکسیل کانال‌های پتاسیمی ROMK2 و اجزاء مسیر آندوسیتوز تداخل عمل وجود داشته باشد و قسمت داخلی ناحیه PDZ (S-E-V) در آندوسیتوز و پایداری کانال‌های پتاسیمی ROMK2 در غشاء دخالت دارد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Effect of the V364D mutation in membrane endocytosis of ROMK2 (Kir1.1b)
چکیده انگلیسی مقاله Introduction: Recent studies suggest that endocytosis of ROMK channels is important for regulation of K+ secretion in cortical collecting ducts. In this study the effect of V364D mutation is examined on the membrane turnover and stability of ROMK2 channel when expressing in Xenopus laevis oocytes. Materials and Methods: In this experimental study, oocytes were isolated by standard protocols using collagenase (Type 1A). Mutations of the cytoplasmic termini of ROMK2 were constructed using the quikchange approach for site-directed mutagensis. Xenopus oocytes were injected with cRNA encoding ROMK2 or V364D mutant three days prior to treatment with BFA solution (time 0). Brefeldin A (BFA) was added to the OR3 medium (+BFA) at concentrations of 5-25 μM (inhibit insertion of new proteins into the cell membrane) or ethanol as BFA vehicle (-BFA). Two-electrode voltage clamp (TEVC) was used to measure oocyte ROMK-dependent currents and membrane potential. Data was analysed using Student’s t-tests or ANOVA as appropriate. Results: Incubation of oocytes expressing ROMK2 channels in both 5µM and 25 µM BFA caused a reduction in the normalized steady state currents. The effect of BFA was dose dependent. In oocytes expressing the V364D mutant, there was no decay in current at any time point during incubation with BFA at either 5 M or 25 M. The fractional current for ROMK2 at 48h following treatment of oocytes with BFA was 0.24  0.05 (n=16) which was significantly different to V364D mutant (1.17  0.09). Conclusion: These results show that the V364D mutation increases the general stability of ROMK and renderes the protein resistant to endocytosis, consistent with the idea that there is an interaction between the C-terminal of ROMK2 and components of the endocytotic pathway. A functional PDZ domain (the S-E-V) plays a key role in determining stability of ROMK.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله ROMK2, BFA, PDZ domain
نویسندگان مقاله سعید حاجی حاشمی | saiid hajihashemi


استنلی وایت | estanli white


نشانی اینترنتی http://amuj.arakmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-62-1&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات