|
|
پژوهشنامه اصلاح گیاهان زراعی، جلد ۸، شماره ۱۷، صفحات ۲۳۰-۲۱۹
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و ارزیابی بیوانفورماتیکی ژن مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) در گیاه آلوروپوس لیتورالیس و بررسی بیش‌بیان آن در گیاه توتون (Nicotina tobacum) |
|
| چکیده فارسی مقاله |
شوری خاک یکی از مهمترین عوامل غیرزنده، با برهم زدن شرایط مطلوب است که سبب بروز اختلالات متابولیسمی در سلولهای گیاهی، از جمله افزایش تولید انواع گونههای اکسیژن فعال (ROS) میگردد .مونودهیدروآسکوربات ردوکتاز (MDHAR) یکی از آنزیمهای کلیدی در مسیر گلوتاتیون-آسکوربات است که نقش احیاکنندگی رادیکالهای مونودهیدروآسکوربات را بر عهده دارد. در تحقیق حاضر آنزیم مونودهیدرو آسکوربات ردوکتاز، از گیاه هالوفیت آلوروپوس لیتورالیس (Aeluropus littoralis) شناسایی، جداسازی و هم‌سانهسازی گردید و به گیاه توتون انتقال داده شد. برای این منظور با توجه به اطلاعات در دسترس در پایگاه NCBI، پرایمرهای مناسب طراحی و با روش RT-PCR توالی ژنی مذکور تکثیر و به منظور توالی یابی در وکتور pTZ57R/T درون باکتری ای.کلای (DH5α) هم‌سانهسازی شد. سپس به منظور انتقال به گیاه توتون، با آنزیم pfu دی. ان. آ. پلیمراز تکثیر گردید. پس از الحاق پروموتر و ترمیناتور 35S به ناقل بیانی pGreen0029، توالی ژنی MDHAR نیز به این ناقل وارد شد و سازهی نوترکیب به سلولهای اگروباکتریوم نژاد LBA4404 ترانسفورم شد و برای تراریختسازی توتون به روش دیسک برگی مورد استفاده قرار گرفت. از گیاهان باززایی شده در محیط انتخابی حاوی آنتیبیوتیک کانامایسین استخراج DNA و سپس RNA صورت گرفت و آزمونهای PCR و RT-PCR انجام شد. آزمون PCR با DNA گیاهان انتخابی نشان داد توالی ژنی MDHAR به سلولهای گیاهان تراریخت وارد شده و بیان مستمر این ژن نیز توسط آزمون RT-PCR تأیید شد. بررسیهای بیوانفورماتیکی روی ژن نشان داد که ژن MDHAR شامل 1436 جفت باز و فاقد نواحی اینترونی است. مقایسهی توالی به دست آمده با توالیهای سایر MDHARهای گیاهی ثبت شده در بانک ژن، بیانگر شباهت بالای این ژن با سایر MDHRهای جدا شده از گیاهان خانوادهی گندمیان بوده که با MDHAR سورگم (Sorghum bicolor)، بیشترین شباهت را داشت. آنالیز ساختار پروتئینی، بین سلولی بودن و نواحی موتیف pyr-redoxin و SDR را اثبات کرده و نیز بررسی ساختار ثانویه، نشاندهندهی 3/78 درصد ساختار مارپیچ آلفا، 1/41 درصد ساختار چین خورده ی بتا و 6/13 درصد ساختار دور بتا یا دور معکوس بود. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning and Bioinformatics Analysis of MDHAR Gene from Aeluropus Littoralis and Over-Expression Analysis in Nicotina Tabacum |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Salinity as one of the most important stresses disturbs favorable growth conditions of the plants leading to several metabolic disorders such as reactive oxygen species (ROS). Monodehydroascorbate reductase (MDHAR) with FAD (Flavin adenine dinucleotide) co-factor is one of the key enzymes in Glutathione-ascorbate pathway which reduces monodehydroascorbate (MDHA) radicals. In this study MDHAR gene was isolated from Aeluropus littolaris, a halophyte plant with, characterized and was transferred to tobacco plants after cloning. Gene specific primers were designed using similar sequences in NCBI and the desired sequence was amplified via RT-PCR, cloned in pTZ57R/T vector and sequenced. Primary bioinformatics assessments revealed that MDHAR gene consisted of 1436 bp lacking intron sequences. For tobacco transformation, cDNA fragment was amplified with Pfu DNA polymerase, inserted into pGreen0029 containing 35s promoter and terminator sequences. The recombinant vector was then introduced to LBA4404 agrobacterium cells, which were used for tobacco transformation via leaf disc method PCR analysis of the putative transgenic plants, indicated successful gene insertion into plant cells and gene transcription was confirmed by RT-PCR. Comparing which MDHAR sequences form other plants in NCBI, A. littoralis gene exhibited a high similarity with genes isolated from gramineae family. The highest similarity (89%) was observed for MDHARs from sorghum (Sorghum bicolor). Protein also analysis has proven that this gene is outside cell, pyr-redoxin and NAD-binding motif area. Secondary structure showed 78.3% alpha helix, 41.1% beta sheet and structure 13.6% B-turn structure or reverse turn. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
آزاده محسنی |
قربانعلی نعمت زاده |
علی دهستانی کلاگر | dehestani kolagar
بهزاد شاهین کلیبر | shahin kaleybar
الهام سلیمانی |
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://jcb.sanru.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-173&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/1462/article-1462-249147.pdf |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
اصلاح نباتات |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|