مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، جلد ۲۶، شماره ۱۳۷، صفحات ۲۳-۳۱
عنوان فارسی طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N۱
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: در این پروژه، هدف کلی تحقیق طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV-1) با استفاده از وکتور pEGFP-N1 بود. کلونینگ ژن Vpr قبلاً درون وکتور pEGFP_N1 صورت نگرفته بود. مواد و روش‌ها: وکتور pUC19 دارای ژن تمام طول Vpr جهت تایید با استفاده از آنزیم‌های محدود کننده برش داده شد. سپس جهت اضافه کردن سایت‌های برش آنزیمی (XhoI, KpnI) در ژن مورد نظر مطابق با سایت های موجود در وکتور pEGFP-N1 با طراحی پرایمر واکنش PCR بر روی ژن Vpr با استفاده از پلاسمید نوترکیب pUC19-Vpr به عنوان الگو انجام گرفت. محصول پس از الکتروفورز، مورد استخراج از ژل قرار گرفته و تخلیص گردید. سپس هر دو محصول PCR و وکتور pEGFP-N1 تحت واکنش هضم آنزیمی قرار گرفتند. در مرحله بعد، واکنش الحاق توسط آنزیم T4 انجام گرفت و این ژن به درون وکتور pEGFP-N1 کلون شده و به درون باکتری DH5a ترنسفورم گردید. در نهایت سازه استخراج شده و با هضم آنزیمی و PCR مورد تایید قرار گرفت. یافته‌ها: در این پروژه ابتدا ژنVpr درون وکتور pUC19 پس از برش آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. سپس این ژن به طور تمام طول و با قرار دادن توالی‌های برش از 2 آنزیم محدودالاثر در طراحی پرایمرهای اختصاصی در واکنش PCR تکثیر داده شد و اندازه محصول در الکتروفورز مورد تایید قرار گرفت. محصول واکنش الحاق ژن Vpr به طور تمام طول در وکتور pEGFP-N1 نیز هم در هضم آنزیمی و هم در PCR مورد تایید قرار گرفت. استنتاج: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی با استفاده از وکتور pEGFP-N1 با موفقیت انجام گرفت.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی، ژن Vpr، وکتور pEGFP-N1
عنوان انگلیسی Designing a Recombinant Construct of pEGFP-N1 Containing the Full Length of Human Immunodeficiency Virus-1 (HIV-1) Vpr Gene
چکیده انگلیسی مقاله Background and purpose: The purpose of this study was to design a recombinant vector pEFGP- N1 containing the full length of HIV-1Vpr gene. To the best of our knowledge, the cloning of Vpr gene in pEGFP_N1 is not previously done. Materials and methods: As a source of Vpr gene the pUC19-Vpr recombinant vector was confirmed by digestion with restriction enzymes BglII and NotI in order to separate the Vpr gene. The specific primers for Vpr gene including the restriction sites of XhoI and KpnI were designed according to the multiple cloning site of pEGFP-N1 and PCR reaction was performed using the pUC 19-Vpr vector as a template. The PCR product was undergone electrophoresis and gel extraction. Digestion reaction was done on both the extracted PCR product and the pEGFP-N1vector. The recombinant pEGFP-N1-Vpr vector was achieved by the ligation reaction using the T4 DNA ligase and it was transformed into the E-coli (DH5α) and propagated. Finally, confirmation was done through the restriction enzyme digestion and PCR amplification. Results: The recombinant vector pUC19-Vpr was confirmed using the restriction enzymes digestion, and then Vpr gene was successfully amplified using its specific primers including restriction sites for XhoI and KpnI. The PCR product was confirmed by electrophoresis. Finally, a recombinant vector pEGFP-N1 containing the full length of human immunodeficiency virus-1 Vpr gene (pEGFP-N1-Vpr) was successfully constructed. Conclusion: HIV-1 Vpr gene in its full length size could be ligated into the pEGFP-N1.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Human Immunodeficiency Virus-1, Vpr gene, pEGFP-N1
نویسندگان مقاله مایده رمضان پور | maedeh ramezanpour
msc student in genetic, faculty of biology, islamic azad university, tehran medical branch, tehran, iran
دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی پزشکی تهران (Islamic azad university of tehran medical sciences)

پونه رحیمی | pooneh rahimi
associate professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran
تهران انیستیتو پاستور ایران، بخش هپاتیت و ایدز
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

مهرداد هاشمی | mehrdad hashemi
associate professor, department of biology, faculty of biology, islamic azad university, tehran medical branch, tehran, iran
دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی پزشکی تهران (Islamic azad university of tehran medical sciences)

سیدمهدی سادات | seyed mehdi sadat
assistant professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran
استادیار، بخش هپاتیت وایدز، انیستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3397-65&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیولوژی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی-کامل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات