مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، جلد ۲۶، شماره ۱۳۷، صفحات ۱۲-۲۲
عنوان فارسی بیان و خالص سازی پروتئین کایمر نوترکیب (۳M۲e-HA۲) واجد نواحی حفاظت شده هماگلوتینین و پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزا در راستای تولید واکسن زیرواحدی جهانی
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: ویروس آنفلوانزا یکی از مهم‏ترین عوامل عفونی در سراسر جهان است که تغییرات آنتی‏ژنیک آن چالش بزرگی در مسیر تولید واکسن می‏باشد. در حال حاضر اکثر پژوهش‏ها بر روی توسعه واکسن‏های زیرواحدی حاصل از پپتیدهای آنتی‏ژنیک حفاظت شده ویروس متمرکز شده است. زیر واحد کوچک مولکول هماگلوتینین (HA2) و بخش آمینی خارج سلولی پروتئین کانال یونی (M2e) با 23 اسید آمینه، در همه ویروس‏های آنفلوانزای A انسانی بسیار حفاظت شده هستند و هدف مناسبی برای تولید واکسن آنفلوانزای وسیع الطیف می‏باشند. مواد و روش‌ها: در این پژوهش، قطعه ژنی 3M2e سنتتیک، بالا دست ژن HA2 در سازه pET28a-HA2 پس از هضم آنزیمی با آنزیم BamH1، کلون شد. سازه واجد کایمر 3M2e-HA2 به باکتری E.coli سویه BL21 منتقل شد و سلول‏ها در محیط مایع LB حاوی کانامایسین (50mg/ml) بعد از القا با ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوزید (IPTG) به صورت کشت شبانه رشد داده شد. بررسی و تایید بیان سازه 3M2e-HA2 به وسیله الکتروفورز روی ژل پلی‏آکریل‏آمید PAGE SDS- و وسترن بلات با استفاده از آنتی‏بادی‏های مونوکلونال اختصاصی انجام شد و سپس پروتئین نوترکیب توسط ستون Ni-TED تخلیص گردید. یافته‌ها: نتایج کلونی PCR و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن 3M2e در وکتور pET28a-HA2 به طور صحیح و در قاب خواندنی دنبال هیستیدینی کلون شده است. استنتاج: شناسایی آنتی‏بادی علیه اپی توپ‏های حفاظت شده HA2 و M2e، گامی مهم به سوی ساخت واکسن جهانی ویروس آنفلوانزا است، بنابراین سازه (3M2e-HA2)تهیه شده در این مطالعه می‏تواند کاندید واکسن زیر واحدی مناسبی برای پیشگیری از این عفونت باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ویروس آنفلوانزا، کایمر 3M2e-HA2، واکسن زیر واحدی
عنوان انگلیسی Expression and Purification of a Recombinant Chimeric Protein (3M2e-HA2) Composed of Influenza Virus Hemaglutinin and Matrix Protein Conserved Domain for Universal Subunit Vaccine Development
چکیده انگلیسی مقاله Background and purpose: Influenza virus is one of the most important respiratory infectious agents. Viral antigenic variations are major problems for vaccine production process. At present, many researches have focused on conserved domains of influenza virus antigenic peptides for subunit vaccine development. Hemagglutinin small subunit (HA2) and the 23 amino acid extracellular N-terminal domain of proton selective ion channel (M2e) are highly conserved in all human influenza A strains and very attractive for broad-spectrum universal influenza vaccine production. Materials and methods: In this study, the synthetic 3M2e gene was cloned upstream of HA2 gene following digestion by BamH1. Chimeric construct pET28a-3M2e-HA2 was transformed into E.coli (BL21) and the cells were grown overnight in LB broth media containing 50 mg/ml kanamycin after induction of isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Expression of chimer protein 3M2e-HA2 was approved by sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and western blot analysis using monoclonal specific antibody. Then, the recombinant protein was purified using Ni-TED columns. Results: The result of colony PCR, restriction enzyme digestion and sequencing revealed that the 3M2e gene was properly cloned into pET28a- HA2 and was in frame to histidin tag. Conclusion: Identification of antibodies against conserved epitopes of (HA2) and (M2e) is an important step toward development of influenza vaccine, hence, chimer protein (3M2e-HA2) prepared in this study could be an appropriate subunit vaccine candidate for preventing influenza virus infection.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Influenza, M2e, Hemagglutinin, chimer, subunit vaccine
نویسندگان مقاله ندا جلیلی | neda jalili
msc in genetic, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iran
کارشناس ارشد ژنتیک، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نجمه طاهری | najmeh taheri
msc in molecular cell biology, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iran
کارشناس ارشد سلولی مولکولی، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

رضوان توکلی | rezvan tavakoli
msc in microbiology, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iran
کارشناس ارشد میکروب شناسی، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فاطمه فتوحی | fatemeh fotoohi
associate professor, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iran
استاد، گروه آنفلوانزا و سایر ویروسهای تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

عطیه اکبری | atieh akbari
msc in genetic, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iran
کارشناس ارشد ژنتیک، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

بهرخ فرهمند | behrokh farahmand
assistant professor, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iran
تهران انستیتو پاستور ایران، بخش آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5029-267&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی-کامل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات