این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فیض، جلد ۱۲، شماره ۴، صفحات ۲۲-۲۸
عنوان فارسی تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه HIV-۱ vif
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: مولکول APOBEC3G ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif HIV-1 عمل می­کند که برای بررسی میانکنش آن با vif HIV-1 ، از سلول­های ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل H9 و PBMC انسانی مولد APOBEC3G استفاده می­شود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسی­ها، نیازمند سلول­های ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید APOBEC3G بنماید. لذا از سلول­های 293T برای ایجاد این دسته از سلول­ها استفاده شد. مواد و روش­ها: از سلول­های 293T برای تولید سلول­های ناپذیرا ( non-permissive ) استفاده شد که این کار پس از ترانسفکشن با کلون­های مولکولی PcDNA-APO3G صورت گرفت و سپس با روش وسترن بلاتینگ، میزان بیان آنها بررسی شد. همچنین فعالیت رپلیکاسیون HIV-1 با استفاده از RT assay و عفونت­زایی آنها به وسیله MAGI assay بررسی شد. نتایج: در این مطالعه، تعدادی رده سلولی 293T ابرازکننده یک فاکتور انسانی ضد HIV-1 به نام APOBEC3G تهیه شد. به آسانی از طریق ایمونوبلاتینگ اثبات شد که چهار کلون از هفت کلون مورد بررسی، APOBEC3G را ابراز می­کنند. به ویژه مشخص شد که دو کلون (A3G-C1,A3G-C4) تولید مقادیر بالاتری از APOBEC3G را در مقایسه با کلون­های سلولی Pooled می­نماید. اثربخشی ترانسفکشن همه این کلون­ها مشابه سلول­های والد بود؛ با تولید سطح قابل قیاسی از ویریون­ها در نتیجه ترانسفکشن کلون­های DNA ویروسی نوع وحشی و vif منفی ( - vif ). به علاوه سطح ابرازی APOBEC3G در بهترین رده سلولی (A3G-C1) ، بسیار بالاتر از سطح ابرازی در یک رده سلولی لنفوسیتی APOBEC3G مثبت و سلول­های تک­هسته­ای خون محیطی بود. در نهایت دخول APOBEC3G در ویریون­های تولید شده در A3G-C1 مونیتور و پیگیری شد. APOBEC3G به راحتی در ذرات ویروسی پروژنی در نتیجه ترانسفکشن کلون پروویروسی vif منفی، و نه در کلون نوع وحشی، تشخیص داده شد. نتیجه­گیری: این نتایج مشخص ساختند که رده سلولی جدید تولید شده برای مطالعات مختلف بررسی میانکنش APOBEC3G انسانی و HIV-1 vif مفید است. 
کلیدواژه‌های فارسی مقاله سلول های ناپذیرا، HIV-1 vif،APOBEC3G ، سلول هایH9 ، PBMC
عنوان انگلیسی Non-permissive cell production for the study of HIV-1 vif
چکیده انگلیسی مقاله Background : APOBEC3G (Apolipoprotein B mRNA Editing enzyme, Catalytic polypeptide-like 3G) is an anti-HIV-1 vif cellular factor that modifies minus strand of viral DNA during reverse transcription. To assess the interaction of this cellular factor with HIV-1 vif, natural non-permissive cells, such as H9 and PBMC cells, are used. Since the transfection of these cells with test DNAs is very inefficient, we are to use non-permissive cells which can stably produce high levels of APOBEC3G. Sort of non-permissive cells for this purpose were 293 T cells. Materials and Methods: 293T cells were used for producing non-permissive cells. This was carried out by transfection of 293T cells using PcDNA-APO3G molecular clone. Then the APOBEC3G expression was checked by western blotting. Also the HIV-1 replication and infectivity were assessed using RT and MAGI assay, respectively. Results: A number of 293T cell lines that express a human antiHIV-1 factor, APOBEC3G, were stablished. Immunoblotting analysis proved that 4 out of 7 examined cell clones readily express APOBEC3G. In particular, two clones (i.e. A3G-C1 and -C4) were found to produce much higher levels of functional APOBEC3G relative to that by pooled cell clones. The transfection efficiency of all cell clones was similar to that of the parental cells, with a potential of producing a comparable level of virions upon transfection of wild type and vif-minus proviral DNA clones. Furthermore, the expression level of APOBEC3G in the best cell line (A3G-C1) was much higher than that of APOBEC3G-positive lymphocyte cell line and peripheral blood mononuclear cells. Finally, the incorporation of APOBEC3G into virions produced in A3G-C1 was monitored. Upon transfection of vif-minus proviral clone, but not of wild type, APOBEC3G was easily detected in progeny viral particles. Conclusion: These Results indicated that our new A3G-C1 cell line is eminently useful for studying various study on the interactions of human APOBEC3G and HIV-1 vif
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله non Permissive cell, HIV-1 vif, APOBEC3G, H9 cell, PBMC
نویسندگان مقاله احمد پیروزمند | ahmad piroozmand
department of microbiology, kashan university of medical sciences, kashan, iran
کاشان، کیلومتر 5 بلوار قطب راوندی، دانشکده پزشکی، گروه میکروبیولوژی و ویرولوژی
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی کاشان (Kashan university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-648&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده عمومی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات