این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
علوم و صنایع غذایی ایران، جلد ۱۵، شماره ۸۱، صفحات ۳۹۹-۴۱۲
عنوان فارسی بهینه سازی توالی ژن رنین گاوی و تهیه سازه ژنی مناسب برای تولید کیموزین در مخمر Pichia pastoris
چکیده فارسی مقاله کیموزین حیوانی بـه عنـوان موثرترین آنزیم برای تولید پنیر مطرح است که این امر به دلیل کیفیت بسیار مناسب بافت و عطر و طعم پنیر تولید شده می‌باشد. با توجه به تقاضای روز افزون نسبت به این آنزیم نیاز است در کنار سایر منابع گیاهی و میکروبی از منابع نوترکیب نیز برای تولید این آنزیم استفاده گردد. در این پژوهش به منظور تولید نوترکیب کیموزین، و نیز بهبود بیان ژن کیموزین گاوی در مخمر، ابتدا توالی ژن کیموزین بر اساس کاربرد کدونی (Codon usage) مخمر پیچیا پاستوریس بهینه‌سازی و سنتز گردید. پس از بهینه‌سازی توالی نوکلئوتیدی، شاخص انطباق کدونی (CAI) از 59/0 به 72/0 افزایش پیدا کرد در حالی‌که، توالی ژنی 83% با توالی بهینه شده مطابقت داشت. تعداد کدون‌های نادر با فراوانی کم‌تر از 10% قبل از بهینه‌سازی 41 عدد بود که پس از بهینه‌سازی هیچ کدونی با فراوانی کم‌تر از 10% یافت نشد. به منظور انتقال ژن کیموزین A به وکتور بیانی pPIC9 مخمری، ژن سنتز شده کیموزین با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و در وکتور PTG-19 همسانه‌سازی گردید. کلونی‌های نوترکیب از طریق روش غربالگری کلونی‌های سفید-آبی گزینش شدند. ژن کیموزین با استفاده از آنزیم‌های Not I و EcoR I از وکتور PTG19-chymA برش داده شده و در وکتور pPIC9 برش یافته با همان آنزیم‌ها همسانه گردید. کلونی‌های نوترکیب pPIC9-chymA با استفاده از تکنیک کلونی ‌PCR شناسایی و انتخاب شدند. ماهیت نوترکیبی و درج صحیح ژن کیموزین در وکتور بیانی مخمری pPIC9 از طریق استخراج پلاسمید و برش با آنزیم برشی BamH I مورد تایید قرار گرفت.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله کیموزین نوترکیب،همسانه‌سازی ژن،آنزیم لخته‌کننده شیر،
عنوان انگلیسی Optimization of calf rennin gene and construction of gene construct for the recombinant chymosin production in Pichia pastoris
چکیده انگلیسی مقاله Animal chymosin due to the high quality of cheese texture and flavor is the most effective enzyme for cheese production. Due to the increasing demand for this enzyme, in addition to the plant and microbial sources, recombinant sources should be considered for chymosin production. In this study, in order to produce recombinant chymosin, as well as improving the expression of bovine chymosin gene in yeast, the sequence of the chymosin A gene was optimized and synthesized based on the codon usage of the Pichia pastoris and was cloned in an appropriate expression vector. The codon adaptation index (CAI) increased from 0.59 to 0.72 after codon optimization. There were 41 yeast rare codons (with frequency of less than 10%) in the bovine chymosin A gene, whereas no rare codons in the codon optimized sequence. In order to transfer the resynthesized chymosin A gene to the yeast expression vector pPIC9, this gene was proliferated using the specific primers and was cloned in the PTG-19 vector. Recombinant (PTG19-chymA) colonies were selected by the screening of white-blue colonies method. The resynthesized chymosin A gene was then cut from PTG19-chymA vector using the restriction enzymes Not I and EcoR I, cloned into the pPIC9 vector and was transformed into DH5α strain of E. coli. Colonies containing recombinant vector (pPIC9-chymA) were identified and selected using colony-PCR technique. The recombinant nature and correct insertion of resynthesized chymosin A gene in the yeast expression vector pPIC9 were confirmed by plasmid extraction and its digestion with BamH I enzyme.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله کیموزین نوترکیب,همسانه‌سازی ژن,آنزیم لخته‌کننده شیر
نویسندگان مقاله سهیلا محب زاده |
گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی

ناصر زارع |
عضو هیات علمی- دانشگاه محقق اردبیلی

رسول اصغری ذکریا |
عضو هیات علمی گروه زراعت و اصلاح نباتات کشاورزی، دانشگاه محقق اردبیلی

بهرام فتحی آچاچلویی |
گروه صنایع غذایی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی

نشانی اینترنتی https://fsct.modares.ac.ir/article_25686_c25fb7b08481a83e0cf2e1115937702f.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات