این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا، جلد ۶، شماره ۴، صفحات ۴۹۶-۵۰۳
عنوان فارسی کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین‌های متعدد باعث بیماری‌های مختلف می‌شود، به همین دلیل روش‌های مؤثر و آسان شناسایی انتروتوکسین­ها موردنیاز است. امروزه غالباً از روش‌های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی‌بادی‌های مونوکلونال استفاده می‌شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی‌بادی‌های زنجیره سنگین یافت شده که VHH یا نانوبادی نامیده می‌شوند. خصوصیات منحصربه‌فرد این آنتی‌بادی‌ها از قبیل اتصال به مولکول‌های کوچک نظیر توکسین‌ها، آن‌ها را کاندیدهای جذابی برای توسعه ترکیبات دارویی نموده است. برای دستیابی به مولکول VHH علیه انتروتوکسین B استافیلوکوکوس تحقیق حاضر انجام‌ شده ‌است. مواد و روش‌ها: غنی‌سازی کتابخانه‌ی فاژی به‌منظور جداسازی نانوبادی‌های اختصاصی علیه توکسین در کارهای قبل انجام‌شده بود. در ادامه وکتور pCANTAB 5E حاوی VHH از باکتری E.coli سویه xl1blue، استخراج و پس از انجام واکنش PCR با پرایمرهای مربوطه، ساب‌کلونینگ در وکتور بیانی (+)pET21a با مکان‌های برش NdeI و XhoI صورت گرفت. ترانسفورماسیون وکتور درون باکتری E.coli سویه بیانی (DE3) BL2I انجام شد. سپس سلول‌ها تحت القای IPTG قرار گرفتند و زمان و شرایط تولید بهینه گردید، درنهایت بیان پروتئین توسط تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: برای تأیید کلونینگ ژن نانوبادی درون وکتور pET21a(+)، توالی نوکلئوتیدی ژن آنالیز و ترانسفورم به باکتری E.coli سویه DE3))BL21 با موفقیت انجام شد. پس از القاء، پروتئین فعال درون سلول توسط روش SDS-PAGE مشاهده و توسط لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. نتیجه‌گیری: در این تحقیق کلونینگ، ساب کلونینگ و بیان ژن نانوبادی انجام شد. تولید این پروتئین نوترکیب می‌تواند گامی مهم در جهت توسعه روش‌های درمانی جدید و یا تولید واکسن علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بردارد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله نانوبادی،VHH ، انتروتوکسین B، استافیلوکوکوس اورئوس
عنوان انگلیسی Cloning and Expression of Nano Body Gene against Enterotoxin B of Staphylococcus Aureus
چکیده انگلیسی مقاله Background & Objectives: Staphylococcus aureus bacteria causes many different diseases by secretion of various enterotoxins. Therefore, it is necessary to develop ways that facilitate the detection of enterotoxins. Nowadays, immunochemical methods which are based on monoclonal antibody technology are used. The heavy chain antibodies that are called VHH or Nano body were found in blood serum of the Camelidae family. The unique properties of this antibody such as their binding to small molecules like toxins make them attractive candidates for the development of immunodiagnostic tests. The present study was done to achieve a VHH molecules against Staphylococcus enterotoxin B. Materials & Methods: Freighting phage library for isolate private Nano bodies against enterotoxin B was done in previous works. Next, pCANTAB 5E vector that consists VHH, extracted from E.coli bacteria strain xl1blue, and after doing PCR process with relative primers, sub cloning in pET21a(+) as an expression vector with cut sites NdeI and XhoI was done. Transformation in E.coli bacteria strain BL21(DE3) was done. Then, the cells effected with IPTG and producing time, and other terms were optimized. Finally, the expression of the protein with SDS-PAGE and western blot techniques was evaluated. Result: For proving cloning of nano body gene in pET21a (+) vector, nucleotide sequence of gene was analyzed, and transforming to E.coli bacteria strain BL21(DE3) was successful. After inspiration, active protein in cell was seen by SDS-PAGE technique and proved by western blot. Conclusion: cloning, sub cloning, and nonabody expression were surveyed in this research. Production of this protein can help to develop new therapeutic methods and produce vaccine against enterotoxin B of Staphylococcus aureus
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Nanobody, VHH, Entrotoxin B, Staphylococcus aureus
نویسندگان مقاله زهرا توسلی | zahra tavassoli
department of biotechnology, malek ashtar university, tehran, iran
پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه صنعتی مالک اشتر (Malek ashtar university of technology)

حمیده روحانی نژاد | hamideh rouhani nejad
department of biotechnology, malek ashtar university, tehran, iran
پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه صنعتی مالک اشتر (Malek ashtar university of technology)

جلیل فلاح مهرآبادی | jalil fallah mehrabadi
the lister laboratory of microbiology, tehran, iran
آزمایشگاه میکروب شناسی لیستر، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://journal.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1177-1&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/228/article-228-331177.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده ایمونولوژی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات