این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فیض، جلد ۲۰، شماره ۵، صفحات ۴۲۰-۴۲۶
عنوان فارسی رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-۱ Nef در سیستم بیان پروکاریوتی
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: پروتئین Nef، یکی از پروتئین­های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپی­توپ­ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ­ های ایمنی قدرتمندی علیه آنها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می­ باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین Nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ­آمیزی معکوس می­ باشد. مواد و روش­ ها: توالی کدکننده پروتئین Nef از وکتور pUC19 توسط PCR تکثیر شد و الحاق آن به داخل وکتور بیانی pGEX6p2 انجام شد. این سازه طی فرایند ترانسفورماسیون به سویه باکتری E.coli BL21 منتقل شده و القای بیان پروتئین با استفاده از آنتی­رپرسور IPTG صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین با استفاده از آنالیز SDS-PAGE و وسترن بلات توسط آنتی­ بادی ضد Nef بررسی گردید. تخلیص پروتئین با استفاده از تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. نتایج: نتایج آنالیز PCR و هضم آنزیمی وجود باند واضح حدود 648 جفت باز را روی ژل آگاروز تأیید کرد که نشان­گر کلونینگ صحیح ژن Nef در وکتور بیان پروکاریوتی pGEX6p2 می­ باشد. هم­ چنین، وجود باند حدود 50 کیلودالتون نشان­گر بیان پروتئین Nef توسط آنتی­بادی منوکلونال ضد Nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد. در نهایت، باند خالص شده پروتئین توسط تکنیک رنگ­آمیزی معکوس به ­دست آورده شد. نتیجه­ گیری: پروتئین نوترکیب Nef بیان شده در میزبان E. coli با بازده مناسب توسط روش رنگ­ آمیزی معکوس تخلیص شد. پروتئین Nef در آینده به­ عنوان یک آنتی­ژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل عفونت ویروس HIV استفاده خواهد شد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Reverse staining: Effective method for purification of HIV-1 Nef protein in prokaryotic expression system
چکیده انگلیسی مقاله Background: Nef protein is one of the HIV regulatory proteins. This protein has various conserved epitopes inducing the efficient immune responses in HIV-1 infected individuals. Thus, Nef protein has been proposed as a suitable candidate for vaccine design. In current study, our goal was the cloning and expression of Nef protein in prokaryotic expression system and its purification using the reverse staining method. Materials and Methods: The coding sequence of Nef protein was amplified from pUC19-nef vector by PCR. Then, nef gene was inserted into the pGEX6p2 expression vector. This construct was transformed into the E.coli BL21 E.coli strain and subsequently protein expression was induced by IPTG anti-repressor. The protein expression was confirmed by SDS-PAGE and Western blot using anti-Nef antibody. Protein purification was performed by reverse staining method. Results: The PCR and digestion analysis showed a clear band of 648 bp in agarose gel indicating the correct cloning of HIV-nef in pGEX6p2 expression vector. In addition, the detection of a clear 50 kDa band in Western blotting using Anti-Nef antibody suggests the Nef protein expression induced by IPTG. Finally, the purified protein was obtained by reverse staining method. Conclusion: The recombinant Nef protein expressed in E.coli was purified by reverse staining method. The Nef protein has the potential of antigenicity for vaccine designing against HIV infections.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله بهنازسادات جعفرزاده | behnaz sadat jafarzade


سید مهدی سادات | seyyed mehdi sadat


رامین یعقوبی | ramin yaghobi


اعظم بوالحسنی | azam bolhassani


نشانی اینترنتی http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-1299&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده medicine, paraclinic
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات