این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۲۹، شماره ۱۳۳، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی ارزیابی و بهینه‌سازی روش‌های مختلف استخراج RNA از بافت‌های منجمد انسانی
چکیده فارسی مقاله مقدمه: استفاده از RNAی سالم جهت به کارگیری در روش های ژنتیک مولکولی مانند میکرواری و Real-time polymerase chain reaction یا RT-PCR کمی، ضروری به نظر می رسد. کار با RNAیی با کیفیت پایین، ممکن است نتایج بعدی حاصل از کار بر روی این RNA را تحت تأثیر قرار دهد. در مطالعه ی حاضر بر آن شدیم با مقایسه و بهینه سازی روش های مختلف استخراج RNA با استفاده از کیت ها ی متفاوت و تیمار با آنزیم DNase، به روشی استاندارد جهت استخراج RNAی از بافت ها ی منجمد انسانی دست یابیم. روش ها: با استفاده از کیت ها ی RNX plus سیناژن، RNeasy Mini و RNeasy Plus Mini کیاژن، استخراج RNAی کل از بافت های منجمد انسانی شامل معده (40 عدد)، گلیوما (5 عدد) و پستان (15 عدد) صورت گرفت و به منظور از بین بردن DNAی ژنومی، از تیمار با DNase استفاده شد. پس از استخراج RNA، کیفیت و کمیت آن با استفاده از اسپکتروفوتومتری و ژل الکتروفورز مورد بررسی قرار گرفت. بعد از سنتز cDNA، روش RT-PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده برای ژن TBP انجام شد و نتایج با استفاده ی از الکتروفورز ژل آگارز مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: RNAی استخراج شده با کیت RNX plus سیناژن بعد از تیمار با DNase نتایج مناسبی در واکنش RT-PCR نشان نداد. RNAی استخراجی با کیت RNeasy Mini کیاژن به دلیل استفاده ی از DNase در مراحل استخراج RNA و کیت RNeasy Plus Mini نیز به دلیل داشتن ستون حذف کننده ی DNA ژنومی کیفیتی خوب برای واکنش RT-PCR داشتند. نتیجه گیری: ترکیب کیت RNaesy Mini، محلول کیازل و استفاده ی از DNase طی مراحل استخراج، مناسب ترین روش جهت استخراج RNA از بافت ها ی منجمد انسانی بوده و RNAی استخراجی می تواند با اطمینان جهت آزمایش ها ی مولکولی پایین دستی مورد استفاده قرار گیرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله استخراج RNA، بافت انسانی، بیان ژن.
عنوان انگلیسی Evaluation and Optimization of Various Procedures of RNA Extraction from Human Frozen Tissues
چکیده انگلیسی مقاله Background: Utilizing an intact RNA is essential while performing molecular genetics methods like microarray and quantitative Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). Using RNA with poor quality may affect the results of downstream manipulations. Our aim in the current study was to compare and optimize various procedures for RNA extraction by using different kits and DNase treatment to find a standard method for RNA extraction from human frozen tissues. Methods: Using Cinnagen RNX plus solution, Qiagen RNeasy Mini Kit and Qiagen RNeasy Plus Mini Kit, total RNA was extracted from human frozen tissues comprising stomach (#40), glioma (#5) and breast (#15). For genomic DNA elimination, extracted RNA was treated with DNase enzyme. After RNA extraction, its quantity and quality was assessed by spectrophotometry and gel electrophoresis. After cDNA synthesis, RT-PCR technique by specific primers designed for TBP gene was performed and results were assessed by agarose gel electrophoresis. Finding: Extracted RNA by Cinnagen RNX plus solution did not show good results in RT-PCR after DNase treatment. Extracted RNAs by Qiagen RNeasy Mini Kit and Qiagen RNeasy Plus Mini Kit were of high quality for RT-PCR reaction because of using DNase treatment during the extraction procedure and an additional genomic DNA elimination column respectively. Conclusion: Combining Qiagen RNeasy Mini Kit, Qiazol solution and DNase treatment during the extraction procedure is the most suitable method for RNA extraction from human frozen tissues and the extracted RNA can be used with assurance in downstream molecular techniques.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله RNA extraction, Human tissue, Gene expression.
نویسندگان مقاله فایزه محمدهاشم | faezeh mohammad hashem
کارشناسی ارشد ژنتیک، بخش ژنتیک، گروه زیست پزشکی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران.
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

پروانه نیک پور | parvaneh nik pour
دکتری تخصصی ژنتیک، بخش ژنتیک، گروه زیست پزشکی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران.
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

مجتبی عمادی بایگی | mojtaba emadi baygi
دکتری تخصصی ژنتیک، گروه ژنتیک، دانشکده ی علوم پایه و پژوهشکده ی زیست فناوری، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران.
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه شهرکرد (Shahr kord university)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/611
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-318904.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات