مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا، جلد ۱۰، شماره ۳، صفحات ۲۴۷۷-۲۴۸۶
عنوان فارسی اثر سایتوتوکسیک فراگاسیاتوکسین C نوترکیب روی سلول های تک هسته ای خون محیطی(مقاله انگلیسی)
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: اکتینوپورین ها پروتئین ها و پپتیدهای سیتولیتک هستند که توسط شقایق دریایی تولید می شوند و باعث تشکیل منفذ در غشای لیپیدی می شوند. فراگاسیاتوکسین C یکی از اعضای این خانواده با وزن مولکولی 20 کیلودالتون می باشد که به طور خاص به اسفنگومیلین در غشای پلاسمایی متصل و منافذ کاتیونی انتخابی به قطر دو نانومتر را در غشا تشکیل می دهد. هدف اصلی از این مطالعه  بررسی فعالیت زیستی سم روی سلول های تک هسته ای خون محیطی(PBMCs)  می باشد. مواد و روش ها: وکتور بیانی pET28a دربرگیرنده توالی کد کننده FraC به سلول مستعد اشرشیا کلی سویه  BL21  ترانسفورم گردید. سپس تخلیص پروتئین بوسیله کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. تخلیص پروتئین توسط الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید تایید شد. غلظت های مختلف از سم روی سلول های قرمز خون (RBC) تست شد و فعالیت همولیزی آن، با ثبت در طول موج 700 نانومتر آنالیز شد. به منظور بررسی فعالیت ضدسلولی سم تخلیص شده، PBMCs با استفاده ازغلظت های متفاوت سم مورد تیمار قرار گرفتند. فعالیت سیتولیتیک پروتئین   FraC روی سلول های تک هسته ای خون محیطی با استفاده از روش ) دی متیل تیازول– دی فنیل تترازولیوم بروماید(MTT  و نوترال رد سنجیده شد. نتایج: ارزیابی فعالیت همولیتیک نشان داد سم در تمام مراحل تخلیص فعالیت خود را حفظ می کند. نتایج بررسی فعالیت سیتولیتیک روی PBMCs نشان می دهد در غلظت های پایینFraC ، نسبت زنده مانی سلولها به گروه شاهد تغییر معنی داری نیافته است. فعالیت متابولیکی PBMCs  فقط در غلظت های بالاتر توکسین (800 و 1000 نانومولار) به طور قابل توجهی کاهش یافت. با توجه به نتایج تست تریپان بلو، داده های حاصل از روش نوترال رد نشان داد با افزایش غلظت سم، سنجش جذب نوترال رد در PBMCs به طور قابل توجهی کاهش می یابد. نتیجه گیری: با وجود فعالیت ضد سلولی سم رویRBC ،FraC  در غلظت های پایین دارای فعالیت سایتوتوکسیک روی سلولهای تک هسته ای خون محیطی نمی باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله اکتینوپورین، فراگاسیاتوکسینC ، سلول های تک هسته ای خون محیطی
عنوان انگلیسی Cytotoxic Effect of Recombinant Fragaceatoxin C on Peripheral Blood Mononuclear Cells
چکیده انگلیسی مقاله Background & Objectives: Actinoporins from sea anemones are potent pore-forming toxins. Fragaceatoxin C belongs to this family with a molecular weight of 20 kDa that mainly binds sphingomyelin in membranes and forming 2nm in diameter cation-selective pore. The aim of this study was the examination of recombinant toxin activity against peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Material & Methods: For recombinant expression of toxin, E.coli Bl21 was employed. The toxin purified by Ni2+-NTA Sepharose affinity chromatography. The purity of toxin was confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis ) SDS-PAGE(. Various dilutions of the toxin were applied on red blood cells, and their hemolytic activity was analyzed by spectrophotometer by recording OD700. To examine the cytotoxic activity of purified toxin, PBMCs were treated with its different concentration. Cytolytic activity of FraC protein on PBMCs was measured using MTT and neutral red uptake assays. Results: Hemolytic assessment indicated that the toxin had retained its activity after purification. Analysis of PBMCs tests showed that low doses of toxin did not change the viability of cells compared to control cells. The metabolic activity of living PBMCs was only significantly decreased at the higher concentration (800 and 1000 NM) of the toxin. Despite the results of trypan blue tests, obtained data indicated that the Neutral red uptake assay was significantly reduced in PBMCs in a dose-dependent manner.  Conclusion: Despite toxicity against RBCs, FraC is not toxic to the peripheral blood mononuclear cells at lower doses.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Actinoporins, Fragaceatoxin C, Peripheral blood mononuclear cells
نویسندگان مقاله لیلا داربرفرد | Leyla Darbarfard
Department of Cellular and Molecular Biotechnology, Institute of Biotechnology, Urmia University, Urmia, Iran
گروه بیوتکنولوژی سلولی و مولکولی، پژوهشکده بیوتکنولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران

مهدی ایمانی | Mehdi Imani
Department of Cellular and Molecular Biotechnology, Institute of Biotechnology, Urmia University, Urmia, Iran
گروه بیوتکنولوژی سلولی و مولکولی، پژوهشکده بیوتکنولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران

سید میثم ابطحی فروشانس | Seyyed Meysam Abtahi Froushani
Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran
گروه علوم پایه، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران

نشانی اینترنتی http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-490-6&slc_lang=en&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده en
موضوعات مقاله منتشر شده انکولوژی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات