این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله علوم پزشکی رازی، جلد ۲۶، شماره ۱۰، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی کلون، بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم کربوکسی پپتیداز G۲
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف : متوتروکسات یکی از داروهای پر مصرف در شیمی درمانی است که نارسایی کلیوی یکی از عوارض جانبی آن است. آنزیم کربوکسی پپتیداز (گلوکارپیداز) آنزیمی باکتریایی است که می­تواند متوتروکسات را به متابولیت­های غیرفعال خود تبدیل کند و پس از درمان با دوز بالای متوتروکسات منجر به حذف متوتروکسات از مسیر غیرکلیوی را فراهم می­کند. گلوکارپیداز تحت نام تجاری وراکساز به بازار عرضه می­گردد. روش کار : در این پروژه ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز G2  در داخل وکتور pUC57 سنتتز گردید. سپس به داخل وکتور pET28a ساب کلونینگ گردید و بین دو سایت برش NdeI  و XhoI  قرار گرفت. پلازمید نوترکیب به داخل سویه بیانی E. coli BL21 ترنسفورم شد و تحت شرایط بیانی مختلف بیان گردید. یافته ها : بیشترین سطح بین در غلظت 5/0 میلی مولار IPTG دمای 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان انکوباسیون 6 ساعت تعیین شد. در انتها پروتئین مورد نظر از طریق کروماتوگرافی تمایلی نیکل آگارز تخلیص و ویژگی های سینتیکی آن بررسی شد. pH و دمای بهینه فعالیت آنزیم به ترتیب 7 و C˚25 به دست آمد. برای سوبسترای متوتروکسات  μM 24 Km=  و  μmol/min  005431/0 Vmax =   محاسبه شد. نتیجه گیری : این مطالعه به منظور تولید و فرآوری آنزیم کربوکسی پپتیداز G2 بوده و در آینده این آنزیم به عنوان یک کاندیدای مهم برای کاهش اثرات جانبی شیمی درمانی می باشد. 
کلیدواژه‌های فارسی مقاله وراکساز، متوتروکسات، داروی نادر، کلونینگ، کربوکسی پپتیداز G2
عنوان انگلیسی Cloning, expression and Characterization of Carboxypeptidase G2 Enzyme from E.coli
چکیده انگلیسی مقاله Background : Methotrexate is one of the most widely used chemotherapy agent that may cause kidney failure as a side effect. Carboxypeptidase G2 (Glucarpidase) is a bacterial enzyme that could convert methotrexate to its inactive metabolites and provide an alternative non-renal pathway for methotrexate elimination in patients with renal dysfunction during high-dose methotrexate treatment. Glucarpidase is marketed under the brand name of Voraxaze. Methods :In this research, carboxypeptidase G2 was synthetized in pUC 57 vector. Then it was subcloned into pET28a between NdeI and XhoI restriction sites. Recombinant vector was transformed into E. coli BL21 and its expressed was examined in various conditions.    Results : The optimum expression of recombinant protein was obtained by the addition of 0.5 mM IPTG at 25 ° C. Then the active enzyme was purified by Nickle affinity chromatography. Optimal pH and temperature of enzyme was7 and 25 ˚C respectively. The Km and Vmax for methotrexate were 24 µM and 0.005431 µmol/min.   Conclusion: The present study was conducted to produce recombinant carboxypeptidase G2 and improve its production efficiency. In future this enzyme could be a potential candidate for preventing chemotherapy side effects. 
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله رضا عالی زاده | Reza Aalizade
دانشگاه تربیت مدرس

نسرین کاردان | Nasrin Kardan
دانشگاه تربیت مدرس

عاطفه خداکرمی | Atefeh Khodakarami
دانشگاه تربیت مدرس

بهاره دبیرمنش | Bahareh Dabirmanesh
دانشگاه تربیت مدرس

خسرو خواجه | Khosro Khajeh
دانشگاه تربیت مدرس

نشانی اینترنتی http://rjms.iums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3831-1&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوشیمی بالینی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات