این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا، جلد ۱، شماره ۲، صفحات ۱۹-۲۳
عنوان فارسی کلون، بیان و تخلیص پروتئین سطحی ۳۶ کیلو دالتونی نوترکیب(Omp۲b) بروسلا آبورتوس
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: بروسلوز یکی از مهم‌ترین بیماری‌های زئونوز بوده که منجر به ضررهای اقتصادی فراوانی می‌شود. گونه بروسلا، باکتری‌های کوکوباسیل گرم منفی داخل سلولی هستند که قادر به تکثیر در فاگوزوم های ماکروفاژها می‌باشند و در بسیاری از گونه‌های حیوانی و انسان‌ها بیماری ایجاد می‌کنند. پیشگیری و تشخیص، هر دو لازمه ریشه کنی این بیماری می‌باشند. شناسایی و ارزیابی آنتی ژن‌های متفاوت سلول بروسلا در پیشبرد برنامه‌های پیشگیری و تشخیص نقش کلیدی دارند. در این تحقیق تولید و تخلیص پروتئین غشای خارجی 36 کیلو دالتونی نوترکیب (Omp2b) بروسلا آبورتوس به انجام رسید. مواد و روش‌ها: ژن پروتئین غشای خارجی 36 کیلو دالتونی بروسلا آبورتوس توسط آنزیم PrimeSTAR® HS DNA polymerase تقویت و در pJET1.2 کلون و ژن هدف در (+)pET28a ساب کلون شد. pET28a نوترکیب در E.coli BL21 (DE3) ترانسفورم شد. بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از 1 میلی مولار IPTG القا و پروتئین‌های حاصله توسط وسترن بلات بررسی شدند و Omp2b نوترکیب توسط آنتی سرم خرگوشی بروسلا ردیابی شدند. نتایج: ظهور باند قهوه‌ای-طلایی در جایگاه واکنش در وسترن بلات تأییدی بر کلون و بیان موفقیت آمیز بود. ما با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، Omp2b نوترکیب را تخلیص کردیم که این روش پروتئین‌های ریفولد شده را بر روی ستون فراهم کرد. نتیجه گیری: Omp2b با موفقیت کلون، بیان و تخلیص شد. پروتئین‌های نوترکیب توسط آنتی سرم پلی کلونال شناسایی شدند که این امر صحت پروسه را تأیید می‌کند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله بروسلا آبورتوس، کلون، بیان، Omp2b
عنوان انگلیسی Cloning and expression of Brucella outer membrane protein 36kDa (OMP2b) in E. coli
چکیده انگلیسی مقاله Background & Objective: Brucellosis is an important zoonotic disease of economic significance. Brucella species are gram-negative, facultative intracellular bacteria, and are capable of replicating in the phagosomes of macrophages. They cause infection in several animal species and humans. Prevention of new diseases and diagnosis of cases infected with the organism are both essential for eradication of the disease. Characterization and evaluation of different antigens of Brucella cells has a key role in progression of prevention and diagnosis programs. Here, we report the production and purification of recombinant 31kDa outer membrane protein Brucella abortus (Omp2b). Materials & Methods: Brucella abortus 36kDa outer membrane protein gene was amplified with PrimeSTAR® HS DNA polymerase, cloned in pJET1.2. The target gene was subcloned in pET28a (+). Recombinant pET28a vectors were transformed into E coli BL21 (DE3). Expression of recombinant protein was induced with 1mM IPTG. Proteins were absorbed to Ni-NTA agarose resins and Recombinant proteins were eluted with 250mM imidazol. Imidazol removed by dialysis. Proteins were assayed by Western-blotting and rOmp2b was probed by Brucella rabbit anti serum. Result: Appearance of a golden brown band at the site of reaction, in Western blotting confirmed successfully clone and expression. We purified Omp2b by affinity chromatography and this method prepared refolds proteins on the column. Conclusion: Omp2b were successfully cloned, expressed and purified. The recombinant proteins were recognized by polyclonal antiserum which suggests the accuracy of procedure.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Brucella abortus, Cloning, Expression, Omp2b
نویسندگان مقاله نازنین بهشتی | nazanin behshti


اشرف محبتی مبارز | ashraf mohabati mobarez


بهمن تبرایی | bahman tabaraie


بهمن تبرایی | bahman tabaraie


نیما خرم آبادی | nima khoramabadi


هانیه آقا بابا | haniyeh aghababa


امیر بختیاری | amir bakhtyiari


نشانی اینترنتی http://journal.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-28&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیولوژی سلولی-مولکولی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات