این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا، جلد ۱، شماره ۴، صفحات ۱۹۷-۲۰۵
عنوان فارسی طراحی و ساخت حامل انتحاری pDS۱۳۲::∆virG به منظور حذف ژن virG در شیگلا فلکسنری ۲a برای تولید سویه واکسنی زنده تخفیف حدت یافته شیگلا
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: سویه های شیگلا باکتری های گرم منفی هستند که واجد توانایی ورود به درون سلول های غیر فاگوسیتیی، از طریق ترشح پروتئین های افکتور (که آنتی ژن های تهاجمی نامیده می شوند (Ipas)) می باشند. یکی از مهمترین آنها پروتئینvirG است. واکسن های زنده تخفیف حدت یافته شیگلا، پاسخ های امیدوار کننده ای را در ایجاد ایمنی حفاظتی در مطالعات بالینی بر روی انسان از خود نشان داده اند. در شرایط حاضر، ساخت سویه های کاندید واکسنی شیگلا بر اساس استفاده از سیستم های تبادل آللی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این مطالعه، طراحی و ساخت حامل pDS132::∆virG به عنوان یک ناقل انتحاری برای حذف هدفمند بخشی از ژن virG در سویه شیگلا فلکسنری 2a بود. مواد و روش ها: در این مطالعه کاربردی، گونه و سرووار شیگلای جدا شده با استفاده از آزمایش سرم شناسی و واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) مورد تایید قرار گرفت. آغازگرهای شناسایی ژن virG طراحی و سپس در حامل pGEM-5zf همسانه سازی و تعیین توالی گردید. بر اساس نقشه برش آنزیمی ژن virG، 1751 جفت باز از ژن virG با استفاده از آنزیم محدودکننده HincП حذف و ژن جهش یافته ∆virG به طور موفقیت آمیزی ایجاد گردید. حامل pGEM∆virG با استفاده از آنزیم های SphI و SalI هضم گردید و سپس در حامل انتحاری (pSD132) همسانه سازی شد. صحت فرآیند با آزمایش های فنوتیپی و ژنوتیپی تایید گردید. یافته ها: سویه شیگلا فلکسنری 2a با آزمایش سرم شناسی و PCR مورد تایید قرار گرفت. توالی ژن virG سویه بومی با سویه های ثبت شده در بانک ژنی به لحاظ ترادف ژنی یکسان بود. حامل انتحاری pDS132::∆virG با در بر داشتن 1484 جفت باز که از ژن virG مشتق شده است، بنابراین می تواند به عنوان یک ناقل انتحاری اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن virG در سویه شیگلا فلکسنری 2a به کار رود. بحث و نتیجه گیری: استفاده از سیستم های انتحاری ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش های ابتدایی مانند پاساژ متوالی روش اختصاصی و موثرتری می باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله تبادل آللی، ژن virG ، شیگلا فلکسنری 2a، شیگلوز، ناقل انتحاری
عنوان انگلیسی Engineered and construction of pDS132::∆virG as suicide vector for targeted gene deletion of virG from Shigella flexneri 2a in order to generation a live attenuated Shigella vaccine
چکیده انگلیسی مقاله Background & Objective: Shigella are Gram negative bacteria capable of inducing their entry into non-phagocytic cells via secretion of various effector proteins called invasion plasmid antigens (Ipas). The most important of them is VirG protein. Live attenuated Shigella vaccines have indicated promise in inducing protective immune responses in human clinical trials. In current situation, constructions of Shigella vaccine candidate strains based on classical allelic exchange systems are considered. The aim of this research was engineered and constructed pDS132::∆virG as a suicide plasmid for targeted deletion regions of virG gene by using allele exchange method in Shigella flexneri 2a. Method & Materials: In this applied study, species and serotype of shigella was confirmed by using serological and Polymerase Chain Reaction (PCR) tests. Detection primers of virG gene were designed and cloned to pGEM-5zf vector and finally, sequencing was done. According to virG restriction enzyme map, 1751 bp of virG gene was removed by using of HincП restriction enzyme and the ∆virG was successfully constructed. The pGEM∆virG vector was digested by use of SphI and SalI enzymes and then cloned to pSD132 as suicide vector. Precision of process were verified through phenotype and genotype experiment. Results: The Shigella flexneri type 2a strain was verified by serological and PCR tests. Sequence of the virG gene in native strain was sequentially identical with the strains submitted in the Gene-Bank database. Since the pDS132::∆virG contains 1484 bp which derived from virG gene, therefore, it can be utilized for interference in virG gene as specific suicide vector in shigella flexneri 2a. Conclusion: Application of suicide systems facilitated mutant construction in more specific and effective method in comparison with the other early techniques such as serial passage.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله محمد دورودیان |


مجتبی سعادتی | mojtaba saadati


سید مصطفی حسینی | sayed mostafa hosseini


نشانی اینترنتی http://journal.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-59&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده ژنتیک عمومی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات